Un test di attivazione artificiale in vitro per lo studio dell'attivazione del recettore Fc da parte degli anticorpi
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:32 min. • July 8th, 2025
Prendi una sospensione di cellule natural killer, o NK.
Aggiungere anticorpi monoclonali anti-CD20 e incubare.
In assenza di cellule tumorali bersaglio che esprimono l'antigene CD20, la regione Fc degli anticorpi si lega ai recettori FcγRIIIa sulla superficie delle cellule NK.
Dopo l'incubazione, aggiungere terreno refrigerato. Centrifugare e rimuovere gli anticorpi non legati.
Quindi, aggiungi gli anticorpi anti-catene leggere κ umane. Incubare.
Questi anticorpi secondari si legano alla catena leggera κ degli anticorpi monoclonali.
La reticolazione dell'anticorpo imita il legame dell'antigene bersaglio, innescando una cascata di segnalazione intracellulare.
Ciò provoca la stimolazione artificiale delle cellule NK in assenza di cellule tumorali.
Le cellule NK attivate subiscono un riarrangiamento citoscheletrico e rilasciano granuli citotossici.
Inoltre, le cellule producono chemochine e citochine.
Dopo la durata desiderata, aggiungere terreni refrigerati per interrompere la stimolazione cellulare.
Centrifugare la provetta. Raccogliere il surnatante e il pellet cellulare per l'analisi a valle delle funzioni delle cellule NK effettrici mediate da anticorpi.
Erogare 100 microlitri di
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