Una tecnica per generare anticorpi monoclonali da cellule B antigene-specifiche

Prendiamo i vettori di espressione eucariotici, che codificano per una catena pesante di anticorpi o una catena leggera di anticorpi, clonati da cellule B antigene-specifiche.

Introdurre la polietilenimmina, un polimero cationico, che interagisce elettrostaticamente con i vettori caricati negativamente, formando poliplex.

Incubare le cellule di mammifero con i poliplessi, che aderiscono alle cellule e vengono internalizzati tramite endocitosi. Gli endosomi risultanti si fondono con i lisosomi.

I polimeri nei poliplessi causano il rigonfiamento osmotico della vescicola, portando alla sua rottura e al rilascio dei vettori.

I vettori rilasciati entrano nel nucleo e vengono trascritti in mRNA a catena pesante e a catena leggera, che subiscono la traduzione tramite ribosomi sul reticolo endoplasmatico.

Le catene peptidiche risultanti si assemblano in anticorpi, che vengono trasportati al Golgi e impacchettati in vescicole secretorie.

Dopo la fusione delle vescicole secretorie e della membrana cellulare, gli anticorpi vengono rilasciati extracellularemente.

Raccogliere il surnatante contenente anticorpi per i saggi a valle.

Semina 15.000 cellule renali embrionali umane in 200 microlitri