Somministrazione di anticorpi potenziata dalla convezione nel cervello di un topo

Fissare un topo anestetizzato che abbia un'incisione della linea mediana cranica su un telaio stereotassico.

Rilevare il bregma, un punto di riferimento sul cranio, e determinare la posizione di iniezione.

Crea un foro di bava nella posizione, evitando di danneggiare la dura madre che copre il cervello.

Prendi un catetere a gradini caricato con anticorpi, montato su un robot stereotassico e collegato a una pompa per infusione.

Il catetere è costituito da un capillare di silice fusa che sporge da un ago metallico, creando un diametro esterno a gradini nel punto di fusione.

Inserire il catetere nel parenchima cerebrale. Avviare la pompa di infusione per creare un gradiente di pressione all'apertura del catetere ed erogare gli anticorpi a una velocità controllata, una tecnica nota come erogazione potenziata dalla convezione.

Il diametro a gradini comprime il tessuto, creando una tenuta.

La guarnizione previene il reflusso di liquidi e consente la distribuzione di grandi volumi di anticorpi, riducendo al contempo il rischio di danni ai tessuti.

Per l'iniezione di anticorpi nello striato murino, confermare la mancanza di risposta al pizzicamento della pelle in un topo anestetizzato e radere la testa con un tagliacapelli. Disinfettare la pelle con tamponi di cotone imbevuti di soluzione di iodio.

Usa un bisturi per praticare un'incisione cutanea di 10 millimetri lungo la linea mediana cranica finendo all'altezza degli occhi. Fissare il mouse nella montatura stereotassica utilizzando il morsetto per il naso e le barre auricolari, facendo attenzione che la superficie del cranio sia orizzontale e ben fissata.

Posizionare la siringa nel robot stereotassico e sincronizzare la punta del trapano con la punta del catetere su un punto di riferimento. Usa una pinza per ritrarre la pelle e localizzare il bregma sulla superficie del cranio. Fare riferimento a bregma nel software utilizzando la punta della punta del trapano e spostare il trapano su una posizione frontale di 1 millimetro e laterale di 2 millimetri dalla posizione di bregma.

Praticare un foro per la bava, facendo attenzione a non danneggiare la dura madre, e spostare la siringa sul foro della fresa. Erogare da 0,5 a 1 microlitro dalla siringa per assicurarsi che non rimangano bolle d'aria nel catetere. Avviare l'erogazione potenziata dalla convezione come dimostrato, osservando la superficie del cranio per individuare eventuali tracce di riflusso del fluido dal punto di iniezione.

Al termine dell'erogazione e della rimozione del catetere, avviare la pompa di iniezione a 0,2 microlitri al minuto per verificare la presenza di tracce di intasamento del catetere durante l'iniezione. Se non si è verificato alcun intasamento, si deve immediatamente osservare una gocciolina di miscela per iniezione proveniente dalla punta del catetere.