Un test per rilevare gli autoanticorpi nel siero umano utilizzando una coltura neuronale ippocampale

Prendi l'embrione di ratto ippocampo.

Aggiungere la tripsina. Incubare per mediare la rottura della matrice tissutale, allentando le cellule dell'ippocampo.

Diluire con un tampone. Incubare per la digestione enzimatica continua con tripsina.

Quindi, trasferire la massa di tessuto in una provetta contenente terreno. Pipettare ripetutamente per la dissociazione meccanica in singole cellule.

Cellule di semina su vetrini coprioggetti rivestiti di poli-L-lisina all'interno di piastre di coltura.

incubare. Le cellule dell'ippocampo aderiscono alle superfici rivestite. I neuroni sviluppano una lamella ed estendono i neuriti minori.

Inoltre, i neuriti crescono con processi assonali e dendritici, formando una rete neuronale.

I neuroni maturi esprimono recettori eccitatori sinaptici, recettori N-metil-D-aspartato o NMDAR.

Dopo l'incubazione, lavare i vetrini coprioggetti con un terreno.

Aggiungere un siero diluito per pazienti affetti da encefalite autoimmune. Gli autoanticorpi si legano agli NMDAR neuronali.

Lavare con tampone e poi fissare le celle.

Aggiungere anticorpi secondari marcati con fluorofori che si legano agli autoanticorpi legati a NMDAR.

Lavare con tampone. Posizionare il vetr