Un test per misurare il titolo anticorpale neutralizzante specifico per il virus respiratorio sinciziale
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:01 min. • July 8th, 2025
Assumere siero umano diluito in serie, inattivato termicamente, contenente virus respiratorio sinciziale o anticorpi neutralizzanti specifici per RSV.
Aggiungere la sospensione virale. Gli anticorpi neutralizzano i virus in modo dipendente dalla diluizione.
Introdurre la miscela in monostrati di cellule epiteliali umane e incubare per l'adsorbimento virale.
Scartare il composto. Aggiungere terreni contenenti carbossimetilcellulosa, formando un rivestimento semisolido. Incubare.
L'RSV utilizza il macchinario della cellula ospite per sintetizzare l'RNA e le proteine virali, che successivamente si assemblano e germogliano come singoli virioni.
Le cellule infette alla fine muoiono. La carbossimetilcellulosa limita il movimento del virus, causando infezioni localizzate e morte cellulare, formando placche.
Rimuovere la sovrapposizione.
Fissare le celle con un tampone contenente acetone. Introdurre un tampone bloccante contenente detergente per permeabilizzare le cellule e prevenire interazioni anticorpali non specifiche.
Aggiungere anticorpi primari mirati alle proteine virali.
Sovrapposizione con anticorpi secondari coniugati con fluorofori mirati agli anticorpi primari.
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