Rilevamento di autoanticorpi delle isole umane mediante un saggio di elettrochemiluminescenza

Per rilevare gli autoanticorpi delle isole – un biomarcatore del diabete di tipo 1 – prelevare campioni di siero umano e aggiungere acido acetico per inibire i componenti interferenti.

Incubare e poi aggiungere un tampone alcalino per neutralizzare l'acido.

Trasferire il siero trattato in una piastra a più pozzetti contenente una miscela di autoantigeni umani delle isole di panciola, tra cui antigeni a cattura biotinilata e antigeni coniugati con rutenio, ciascuno a una concentrazione ottimale per il saggio.

L'autoanticorpo delle isole nel campione positivo collega l'antigene coniugato con rutenio all'antigene di cattura biotinilato, formando un complesso antigene-anticorpo.

Trasferire la miscela in una piastra di elettrochemiluminescenza rivestita di streptavidina pretrattata con un agente bloccante e dotata di elettrodi di lavoro e controelettrodi.

Incubare per consentire interazioni del complesso biotinilato con la streptavidina legata e quindi lavare.

Aggiungere un tampone contenente tripropilammina o TPA.

In uno strumento di elettrochemiluminescenza, l'applicazione di tensione tra gli elettrodi avvia l'ossidazione del rutenio e del TPA, generando radicali TPA.

I radicali TPA e