JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:48 min. • July 8th, 2025
Iniziare con i dischi di carta da filtro funzionalizzati con ammina e immergerli in glutaraldeide, un reagente reticolante.
La glutaraldeide reagisce con i gruppi amminici attraverso una reazione ammina-aldeide.
Mettere i dischi in un tubo. Aggiungere acqua, agitare e aspirare per rimuovere la glutaraldeide residua.
Dopo l'essiccazione, introdurre gli anticorpi di cattura specifici del frammento di immunoglobulina-G-Fc. I gruppi amminici su questi anticorpi interagiscono con i gruppi aldeidici sui dischi di carta, facilitando la loro immobilizzazione covalente.
Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati e introdurre un tampone bloccante per evitare il legame non specifico.
Quindi, aggiungi un campione di prova contenente molecole di immunoglobulina G sul disco di carta. Le molecole di immunoglobulina G interagiscono con gli anticorpi di cattura.
Sovrapposizione con anticorpi di rilevamento specifici per frammenti IgG-Fc coniugati con perossidasi di rafano che interagiscono con l'immunoglobulina G pre-legata.
Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati e aggiungere una miscela di substrato cromogenico e perossido di idrogeno.
In presenza di perossido di idrogeno, la perossidasi
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