JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:54 min. • July 8th, 2025
Prelevare una micropiastra contenente il fungo Candida tropicalis.
Le cellule secernono Sap2, un enzima proteolitico che scinde una glicoproteina transmembrana chiamata Msb2, rimuovendo il suo dominio inibitorio.
Questo induce il fungo ad aderire al fondo e a crescere in una microcolonia di lieviti e forme filamentose. Le cellule secernono componenti solubili e biopolimeri, avviando la formazione di biofilm.
Aggiungere un campione di siero contenente anticorpi specifici per Sap2 a pozzetti selezionati e incubare al buio.
Gli anticorpi si legano a Sap2 e ne neutralizzano l'attività, impedendo la vitalità cellulare e la maturazione del biofilm.
Nei pozzetti non trattati, il biofilm matura in una fitta rete di cellule e matrice extracellulare.
Aspirare il liquido, lavare il biofilm e asciugare la piastra all'aria. Aggiungere un substrato cromogenico e incubare al buio.
Le cellule vitali, utilizzando ossidoreduttasi legate alla membrana, riducono il substrato a un prodotto colorato.
Trasferire il surnatante colorato e leggere l'assorbanza.
Una minore assorbanza nei pozzetti trattati con siero indica l'inibizione del biofilm mediata da anticorpi.
Preparare diluizioni seriali di campioni
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