Una tecnica di immunofluorescenza a doppia marcatura per visualizzare le proteine dell'ospite e del patogeno in una cellula infetta

Inizia con cellule epiteliali fisse e permeabilizzate infettate da un parassita patogeno.

Aggiungere un buffer di blocco per impedire il legame di anticorpi non specifici.

Sovrapposizione con anticorpi primari policlonali di topo, che interagiscono specificamente con le proteine del parassita.

Aggiungere anticorpi secondari marcati con fluorofori rossi lontani che interagiscono con gli anticorpi primari legati alle proteine parassite.

Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati. Blocco con anticorpi anti-topo che si legano agli anticorpi primari, riducendo al minimo la cross-reattività durante la marcatura della proteina ospite.

Aggiungere anticorpi primari monoclonali di topo che hanno come bersaglio le ribonucleoproteine dell'ospite all'interno delle cellule epiteliali.

Sovrapposizione con un mix di anticorpi secondari marcati con fluoroforo verde e falloidina coniugata con fluoroforo rosso, facilitando la marcatura rispettivamente degli anticorpi primari legati alla proteina ospite e dell'actina.

Lavare con un tampone. Montare utilizzando un mezzo contenente coloranti di DNA, conferendo una colorazione blu al nucleo ospite, al nucleo del parassita e al cinetoplasto.

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