Produzione di anticorpi da una coltura di crescita eccessiva in batch di cellule di mammifero trasfettate

Iniziare con un pallone contenente cellule di mammifero trasfettate stabilmente in un terreno privo di siero integrato con un tensioattivo non ionico per prevenire l'aggregazione cellulare.

Queste cellule trasportano un genoma modificato contenente geni integrati a catena pesante e leggera per la produzione di anticorpi terapeutici.

Introdurre il triptone, una fonte ricca di sostanze nutritive di peptidi e aminoacidi essenziali per il metabolismo cellulare.

La cellula utilizza questi amminoacidi e peptidi e si moltiplica, provocando una crescita eccessiva che supporta una maggiore resa anticorpale.

L'espressione dei geni nelle cellule guida la produzione di polipeptidi a catena pesante e leggera.

Nel reticolo endoplasmatico, queste catene si ripiegano e dimerizzano tramite legami disolfuro inter-catena, formando anticorpi terapeutici.

Nell'apparato di Golgi, gli anticorpi subiscono modificazioni post-traduzionali. Vengono quindi confezionati in vescicole e rilasciati nel mezzo.

Incubare le cellule per un periodo più lungo per aumentare la produzione di anticorpi.

Quando la vitalità cellulare inizia a diminuire, raccogliere il surnatante.

Filtrare il surnatante contenente anticorpi terapeutici e conservarlo a una temperatura più bassa per un uso successivo.

Seminare le cellule a 2 x 10⁵ cellule per millilitro in 100 millilitri di terreno privo di siero in due fiasche. Incubare le cellule a 37 gradi Celsius e al 5% di anidride carbonica a 120 rotazioni al minuto per 24 ore. Alla coltura integrata con sostanze nutritive, aggiungere il triptone a una concentrazione finale dello 0,5%. Quindi, utilizzare un terreno privo di siero per equalizzare il volume della coltura non integrata. Incubare le cellule per altri sette giorni.

Dall'ottavo giorno di coltura in poi, contare le cellule ogni giorno utilizzando un emocitometro per monitorare la vitalità cellulare. Una volta che la vitalità cellulare raggiunge meno dell'80%, raccogliere la coltura mediante centrifugazione a 3.000 volte g per 15 minuti. Quindi, sterilizzare il surnatante con un filtro da 0,22 micrometri. Conservare i surnatanti a 4 gradi Celsius a breve termine o congelarli a gradi Celsius a lungo termine.