JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:03 min. • July 8th, 2025
Prelevare una colonna per cromatografia di affinità contenente perle di agarosio coniugate alla proteina A, una proteina legante gli anticorpi.
Aggiungere un tampone legante con un pH neutro per equilibrare la colonna.
Caricare il surnatante di coltura da una coltura cellulare produttrice di anticorpi, contenente anticorpi monoclonali e proteine cellulari contaminanti.
Il pH neutro facilita il legame della proteina A con la regione Fc degli anticorpi mentre i contaminanti fluiscono attraverso.
Misurare l'assorbanza UV del flusso per creare un cromatogramma. Un'elevata assorbanza durante il caricamento del campione indica proteine non legate nel flusso.
Lavare la colonna con il tampone legante per rimuovere i contaminanti non specificamente legati.
Aggiungere un tampone di eluizione con un pH basso per interrompere l'interazione proteina A-anticorpo. Raccogliere gli anticorpi eluiti monitorando il picco di assorbanza.
Neutralizzare il pH per prevenire la degradazione degli anticorpi e trasferirlo in un filtro centrifugo.
Centrifugare per concentrare gli anticorpi e risospendere in un tampone per i saggi a valle.
Dopo aver preparato i buffer e inizializzato il sistema FPLC in base al
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