Una tecnica di colorazione in immunofluorescenza per rilevare la neurogenesi dell'ippocampo adulto

Prendiamo una sezione cerebrale murina costituita dal giro dentato dell'ippocampo, un sito per la neurogenesi composto da progenitori neuronali in fasi di differenziazione distinte.

Trasferire la sezione in una soluzione che blocca la permeabilizzazione. Le molecole detergenti nella soluzione permeabilizzano le cellule, mentre le proteine bloccano i siti di legame non specifici.

Aggiungere un cocktail di anticorpi primari mirati a specifici marcatori di neurogenesi, una proteina associata ai microtubuli e una proteina del filamento intermedio.

Rimuovere gli anticorpi non legati. Introdurre diversi anticorpi secondari marcati con fluorofori che si legano agli anticorpi primari.

Aggiungere proteine sieriche dallo stesso ospite di uno degli anticorpi primari, saturando i paratopi sugli anticorpi secondari.

Introdurre frammenti Fab monovalenti che saturano gli epitopi delle proteine del siero, impedendo il legame aspecifico.

Aggiungere un secondo anticorpo primario allevato dallo stesso ospite, legandosi a un'altra proteina del filamento intermedio.

Introdurre anticorpi secondari marcati con fluorofori che hanno come bersaglio il secondo anticorpo primario.

Utilizzando la microscopia a