JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:04 min. • July 8th, 2025
Inizia lavando una sezione fissa del cuore in un tampone di cacodilato di sodio che stabilizza la struttura del tessuto. Immergere la sezione nel tetraossido di osmio per colorare i lipidi di membrana.
Trattare con acetato di sodio per mantenere un pH ottimale per la colorazione.
Aggiungere l'acetato di uranile alle biomolecole coloranti, fornendo un migliore contrasto durante la microscopia.
Disidratare il tessuto in concentrazioni crescenti di etanolo seguito da acetone.
Incorporare il tessuto in una resina, ottenere sezioni ultrasottili e trasferirle su una griglia di microscopia.
Introdurre il meta-periodato di sodio per rimuovere il tetraossido di osmio, smascherando la proteina cellulare.
Il composto ossida anche la glicoproteina, creando gruppi aldeidici reattivi, che vengono neutralizzati dal trattamento con glicina.
Introdurre un tampone bloccante, impedendo il legame di anticorpi non specifici.
Aggiungere anticorpi primari specifici per la proteina bersaglio seguiti da anticorpi secondari biotinilati.
Aggiungi punti quantici coniugati con streptavidina che si legano alla biotina.
Al microscopio elettronico, le regioni marcate con punti quantici mostrano un contrasto più e
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