Una tecnica di colorazione dell'organo a montaggio intero per l'imaging tridimensionale del rene

Prendi un rene di topo fisso. I lipidi nel tessuto causano la dispersione della luce e i pigmenti causano l'assorbimento della luce, rendendo le cellule opache.

Trattare il tessuto con CUBIC-L per la delipidazione e la decolorazione. L'amminoalcol contenuto in CUBIC-L rimuove i lipidi e i pigmenti, riducendo al minimo la dispersione della luce e aumentando la trasparenza.

Anche le molecole detergenti di CUBIC-L permeabilizzano le cellule.

Introdurre un cocktail di anticorpi primari che si lega alla tirosina idrossilasi citoplasmatica nei neuroni dei nervi simpatici e all'actina muscolare liscia alfa nelle cellule muscolari lisce dei vasi.

Aggiungere anticorpi secondari marcati con fluorofori che si legano agli anticorpi primari.

Eseguire la postfissazione tissutale per preservare il trattamento con anticorpi.

Immergere il tessuto in CUBIC-R+ che sostituisce l'acqua e corrisponde all'indice di rifrazione delle proteine, riducendo ulteriormente la dispersione della luce e aumentando la trasparenza.

Sotto un microscopio a fluorescenza a foglio luminoso, i fogli luminosi illuminano il tessuto, eccitando i fluorofori.

Cattura la luce emessa dal fluoroforo e ricostruisci un'immagine trid