JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:09 min. • July 8th, 2025
Prendi la criosezione di una biopsia cutanea di un paziente con malattia di Parkinson racchiusa in un mezzo di inclusione.
Il tessuto comprende un'epidermide più esterna, un derma sottostante e grasso sottocutaneo innervato dai nervi.
Lavare la sezione per rimuovere il mezzo di inclusione. Trasferirlo in una soluzione che blocca la permeabilizzazione, permeabilizzando le cellule e bloccando i siti di legame non specifici.
Immergere la sezione in un cocktail di anticorpi primari per ottenere una marcatura uniforme degli anticorpi, chiamata colorazione flottante.
Gli anticorpi entrano nei neuroni e si legano agli aggregati di alfa-sinucleina distribuiti lungo gli assoni – una forma aggregata caratteristica delle malattie neurodegenerative – e alle idrolasi carbossil-terminali.
Introdurre anticorpi secondari coniugati con fluorofori che si legano agli anticorpi primari.
Trattare con un colorante legante il DNA fluorescente che colora il nucleo.
Posizionare il fazzoletto su un vetrino, applicare un mezzo di montaggio e sigillare con un vetrino coprioggetti.
Al microscopio confocale, la fluorescenza di entrambi gli anticorpi rivela la presenza di aggregati di alfa-sinucleina lungo gli a
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