Rilevamento degli anticorpi anti-glicani circolanti con un array di glicani stampato

Iniziare con un glicochip funzionalizzato con sotto-array di glicani stampati organizzati in blocchi di array.

Ogni punto nel sottoarray rappresenta un glicano distinto, un polimero a base di carboidrati con variazioni nella composizione dei monosaccaridi, nella lunghezza della catena e nel modello di ramificazione.

Trattare il glicochip con un tampone bloccante per bloccare i siti di interazione non specifici.

Trasferire il glicochip e introdurre il siero di topo diluito in un tampone integrato con tensioattivo per ridurre al minimo l'aggregazione di anticorpi. Incubare sotto agitazione.

L'agitazione favorisce la distribuzione uniforme del siero, facilitando il legame selettivo degli anticorpi anti-glicani a glicani specifici in base a caratteristiche molecolari distinte.

Lavare con concentrazioni decrescenti di un tampone contenente tensioattivo per disturbare il legame non specifico e risciacquare.

Sovrapporre il glicochip con anticorpi secondari coniugati con biotina anti-topo, interagire con anticorpi anti-glicani pre-legati e lavare.

Introdurre streptavidina marcata con fluoroforo, che si lega agli anticorpi secondari biotinilati. Lavare e rimuovere la soluzione in eccesso.

S