JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:57 min. • July 8th, 2025
Posizionare un piatto di coltura con embrioni di pesce zebra dechorionati incorporati nell'agarosio su un tavolino da microscopio.
Assumere una soluzione colorante contenente una bassa concentrazione di coniugati anticorpali, contenente un anticorpo marcato con fluorescenza rossa e un anticorpo anti-DeltaD.
Iniettare la soluzione colorante nel ventricolo rombencefalico dell'embrione, mirando ai progenitori della glia radiale in divisione attiva o RGP.
Rilascia l'embrione incorporato e recuperalo in un mezzo ricco di sostanze nutritive.
Durante il recupero, i coniugati fluorescenti interagiscono con alcune molecole DeltaD del ligando di Notch su RGP, avviando l'internalizzazione e la formazione di endosomi.
La bassa concentrazione di coniugati consente ai ligandi DeltaD non legati di interagire con il recettore di Notch, attivando la via di segnalazione di Notch nelle RGP.
Dopo il recupero, trasferire un embrione anestetizzato con agarosio in un piatto di vetro con il lato dorsale rivolto verso il basso per l'imaging.
Eseguire l'imaging a fluorescenza time-lapse per catturare la divisione cellulare, che mostra una partizione asimmetrica degli endosomi fluorescenti contenenti DeltaD
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