Immunolocalizzazione delle proteine dell'arabinogalattano e delle pectine nei tessuti vegetali

Prendi un vetrino con pozzetti di reazione contenenti sezioni sottili di diversi tessuti vegetali. I tessuti sono fissati e incorporati all'interno di una resina per l'immunocolorazione.

Posizionare il vetrino all'interno di una camera di incubazione buia e umida per evitare l'esposizione alla luce e l'evaporazione del reagente durante le fasi successive.

Introdurre una soluzione bloccante per prevenire l'interazione anticorpale non specifica.

Lavare per rimuovere la soluzione bloccante in eccesso, quindi aggiungere gli anticorpi primari antigene-specifici e incubare.

Gli anticorpi si legano ai loro antigeni bersaglio, vale a dire le proteine arabinogalattano e le pectine nella parete cellulare.

Introdurre anticorpi secondari coniugati con fluorofori, che si legano agli anticorpi primari.

Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati e applicare un colorante fluorescente che si lega alla cellulosa, etichettando la parete cellulare.

Aggiungere un mezzo di montaggio e sigillare con un vetrino coprioggetti.

Al microscopio, la fluorescenza del colorante e degli anticorpi legati aiuta a visualizzare la cellulosa nelle pareti cellulari delle piante colocalizzate con proteine arabinogalat