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Iniziare con una cartuccia microfluidica dotata di serbatoi di stoccaggio e pompe unidirezionali che erogano i reagenti attraverso canali in una zona di reazione.
La zona di reazione contiene più punti immobilizzati con allergeni distinti.
Caricare il tampone di lavaggio, il tampone bloccante, gli anticorpi secondari coniugati con perossidasi e un substrato di perossidasi chemiluminescente negli appositi serbatoi.
Aggiungere un campione di siero contenente immunoglobuline E o IgE allergene-specifiche.
Avviare l'analisi all'interno di un analizzatore a chemiluminescenza.
All'interno della zona di reazione, il buffer di blocco scorre e blocca i siti di interazione non specifici.
L'introduzione del siero permette alle IgE di interagire con gli allergeni immobilizzati.
Il lavaggio elimina le IgE non legate.
Successivamente, gli anticorpi secondari coniugati con la perossidasi fluiscono e interagiscono con le IgE immobilizzate.
Il lavaggio successivo rimuove gli anticorpi non legati.
L'analizzatore introduce quindi il substrato chemiluminescente e il perossido di idrogeno.
La perossidasi ossida il substrato, emettendo luminescenza.
L'intensità della luminescenza in ogni punto fornisce un'indicazione quantificabile delle distinte IgE allergene-specifiche nel siero.
Per testare i campioni di siero per gli anticorpi sierici delle immunoglobuline E contro gli allergeni interi, selezionare casualmente tre campioni con almeno 900 microlitri di siero, prendere il chip dal kit e numerarlo. Quindi, accendere il computer e l'analizzatore. Avviare il programma LabIT sul computer.
Se viene visualizzata la finestra di avviso del riquadro scuro, fare clic su OK per eseguire un test di tenuta. Quindi, fare clic sul logo centrale per accedere all'interfaccia operativa. Controllare la temperatura di reazione e la temperatura del dispositivo ad accoppiamento di carica o CCD. La temperatura di reazione dovrebbe salire a 37 gradi Celsius più o meno 1 in circa 10 minuti e la temperatura del CCD dovrebbe scendere a meno 15 gradi più o meno 1 gradi Celsius.
Quando la temperatura del CCD è scesa a meno 15 gradi più o meno 1 grado Celsius, verificare che non siano rimasti altri oggetti all'interno dello strumento e chiudere lo sportello. Quindi fare clic su Strumenti, Test di sistema, Test di tenuta. Al termine del test, verrà visualizzata la finestra del rapporto.
Successivamente, caricare 620 microlitri di tampone di lavaggio, 120 microlitri di tampone bloccante, 60 microlitri di coniugati A e B, 60 microlitri di substrati A e B e 100 microlitri di ciascun campione di siero nei corrispondenti serbatoi di reagenti sulla cartuccia microfluidica. Dopo aver fatto clic su ID cartuccia, utilizzare lo scanner di codici a barre per scansionare il numero di serie della cartuccia e inserire l'ID del campione. Quindi, posizionare la cartuccia nell'analizzatore, chiudere lo sportello, fare clic su analizzatore, quindi eseguire per avviare l'analisi.