JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:05 min. • July 8th, 2025
Inizia con un tubo che trasporta particelle legate alla membrana derivate da cellule chiamate vescicole extracellulari, o EV, che mostrano composizioni antigeniche uniche.
Introdurre nanoparticelle magnetiche, MNP, contenenti anticorpi di cattura coniugati con frammenti Fab marcati con fluorescenza.
Incubare per facilitare l'interazione tra le MNP con antigeni specifici delle EV, formando complessi MNP-EV.
Aggiungere immunoglobuline-G per bloccare i siti di legame delle Fc, quindi introdurre anticorpi di rilevamento marcati in fluorescenza per colorare altri antigeni sulle particelle catturate.
Caricare questa miscela su una colonna magnetica prelavata posta in un separatore magnetico.
Il campo magnetico trattiene le particelle catturate da MNP all'interno della colonna. Sostituire il tampone per rimuovere gli anticorpi non legati.
Recuperare la colonna dal separatore magnetico, eluire le particelle catturate da MNP con un tampone e fissarle per preservarne l'integrità strutturale.
Analizzare le particelle immunocatturate mediante citometria a flusso; segnali di fluorescenza distinti da antigeni colorati sono correlati con le caratteristiche antigeniche uniche delle vescicole extra
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