JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:39 min. • July 8th, 2025
Prendi una piastra a più pozzetti contenente cellule di mammifero incapsulate in un sistema di idrogel che imita l'ambiente naturale della matrice extracellulare.
Rimuovere il terreno di coltura. Trattare con un tampone di fissazione per reticolare le proteine, preservando l'integrità cellulare.
Aggiungere una soluzione contenente detergente per permeabilizzare la membrana cellulare.
Introdurre una soluzione bloccante per prevenire il legame di anticorpi non specifici nei passaggi successivi.
Aggiungere un cocktail di anticorpi primari che entra nelle cellule e si lega specificamente ai filamenti intermedi citoplasmatici e al fattore di trascrizione target.
Rimuovere gli anticorpi non legati. Introdurre anticorpi secondari marcati in fluorescenza e una colorazione nucleare per marcare il DNA in fluorescenza.
Rimuovere le molecole non legate.
Montare la coltura di idrogel su un vetrino utilizzando un mezzo di montaggio.
Utilizzare un microscopio confocale per osservare le cellule immunocolorate.
Per prima cosa, aspirare il terreno da ogni pozzetto. Quindi, lavare i pozzetti con 1 millilitro di DPBS caldo. Al termine del lavaggio, aggiungere 750 microlitri di soluzione di fissaggio a
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