Rilevamento e misurazione di peptidi target con un biosensore immunosonda capacitivo

Inizia con un filo di platino rivestito di perfluoroalcossisi assemblato con uno strato di polidopamina.

Immergere questa sonda in una soluzione contenente anticorpi specifici del peptide bersaglio, che si immobilizzano sulla polidopamina, formando un'immunosonda.

Lavare e posizionare l'immunosonda in una camera di flusso con un elettrodo di terra in cloruro d'argento, stabilendo un circuito.

Innanzitutto, introdurre il tampone e applicare una tensione per attivare l'immunosonda, consentendole di funzionare come una batteria o un condensatore, immagazzinando energia sotto forma di carica elettrica.

Registrare il segnale elettrico per generare la linea di base.

A questo punto, esporre il biosensore a una soluzione contenente i peptidi bersaglio.

Questi peptidi si legano agli anticorpi sulla sonda, provocando un'alterazione della carica locale e dell'energia immagazzinata nel biosensore.

Registrare il segnale elettrico. Un aumento del segnale indica la presenza del peptide bersaglio, mentre l'entità di questo segnale è correlata alla concentrazione del peptide bersaglio.

Per prima cosa, taglia una lunghezza di 25 centimetri di filo di platino rivestito di perfluoroalcossi. Quindi, utilizzando un bisturi, rimuovere circa 5 millimetri di rivestimento di perfluoroalcossi da un'estremità, facendo attenzione a non tagliare il filo di platino. Ora, inserisci l'estremità spelata del filo di platino in un pin del connettore maschio placcato in oro da 1 millimetro. Quindi, utilizzando una pinza ad ago, crimpare i denti del pin del connettore attorno all'estremità spelata del filo di platino e saldare il filo di platino al pin del connettore placcato in oro.

Successivamente, preparare la soluzione di dopamina aggiungendo 50 milligrammi di dopamina cloridrato in 50 millilitri di PBS da 10 millimolari, con pH 6, e mescolare mescolando. Dopo aver sciolto completamente la dopamina, posizionare la punta del filo di platino nel recipiente contenente il PBS appena integrato con dopamina. Collegare l'elettrodo a disco in cloruro d'argento al canale di terra nello stadio principale. Quindi, posizionare il disco di cloruro d'argento nel recipiente contenente PBS integrato con dopamina e filo di platino.

Prima di procedere oltre, collegare uno shunt di filo ai canali di riferimento dello stadio di testa. Aprire il software di acquisizione dati interattivo e impostare un protocollo di potenziale di comando per elettrodeposizione a dente di sega impostando il potenziale di avvio a meno 0,6 volt, il potenziale finale a 0,65 volt, la velocità di scansione a 0,04 volt al secondo e la durata della deposizione a 420 secondi.

Dopo aver completato la deposizione di polidopamina, rimuovere il pellet macinato di cloruro d'argento e la punta del filo di platino dal recipiente. Posizionare la punta del filo in una microprovetta contenente PBS a pH 7,4 per 2-5 minuti e assicurarsi che la punta del filo non tocchi i lati o il fondo della microprovetta. Quindi, preparare la soluzione anticorpale combinando l'anticorpo di interesse con il PBS di pH 7,4, in un rapporto da 1 a 20, in un recipiente di dimensioni adeguate.

Successivamente, immergere la punta dell'elettrodo di platino depositata in polidopamina in una soluzione di anticorpi per due ore a temperatura ambiente, assicurandosi che la punta del filo di platino sia sospesa in soluzione e non poggi sulla superficie interna del microtubo. Posizionare la punta funzionale dell'immunosonda capacitiva nella camera di flusso, facendo attenzione a non disturbare in alcun modo la punta dell'elettrodo, poiché ciò potrebbe danneggiare la punta sensoriale della sonda.

Prima del primo test sperimentale, eseguire un'esecuzione standard TBS per condizionare l'immunosonda capacitiva e, per il protocollo di tensione, impostare il potenziale di passo positivo a 110 millivolt, il potenziale di passo negativo a meno 5 millivolt, la durata del passo a 20 millisecondi e la durata dell'acquisizione a 600 secondi.

Successivamente, crea la soluzione peptidica di interesse, utilizzando lo stesso TBS. Per mantenere la composizione del superfusato, impostare un sistema di collettori in cui il superfusato può essere commutato tra TBS e TBS integrato con peptidi. Utilizzare i parametri standard TBS e impostare il protocollo di acquisizione dati con rilevamento peptidico impostando la durata dell'acquisizione su 360 secondi.