Un test in vitro per misurare la fagocitosi cellulare anticorpo-dipendente da parte dei fagociti
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:03 min. • July 8th, 2025
Prendiamo le microsfere marcate in fluorescenza coniugate a un antigene di interesse. Gli antigeni immobilizzati sono legati ad anticorpi antigene-specifici.
Aggiungi leucociti, inclusi linfociti non fagociti, granulociti fagocitici e monociti. Incubare la miscela in condizioni fisiologiche.
La regione Fc dell'anticorpo immobilizzato si lega al recettore Fc sul fagocita, innescando la fagocitosi cellulare anticorpo-dipendente, o ADCP.
Centrifugare per pellettare le cellule e scartare il surnatante contenente microsfere non internalizzate.
Aggiungi una colorazione vitale che entra nelle cellule morte, etichettandole in modo fluorescente.
Centrifugare per pellettare le celle e rimuovere il surnatante.
Aggiungere anticorpi marcati in fluorescenza che si legano ai leucociti.
Centrifugare per scartare il surnatante e fissare le cellule.
Utilizzando la citometria a flusso, in primo luogo, eliminare le cellule morte che sono positive per la colorazione di vitalità.
Quindi, seleziona i leucociti vitali e discrimina tra granulociti, monociti e linfociti in base alla loro granularità e alle proprietà di dispersione.
Misurare l'intensità della fluorescenza delle cellule fagocitiche positive a
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