JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
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Assumere un tubo contenente una sospensione di batteri intestinali umani.
Aggiungi particelle simili a virus del norovirus umano, o VLP. Le VLP contengono un capside virale intatto ma mancano di RNA genomico, il che le rende non infettive per l'uomo.
Durante l'incubazione, le proteine del capside VLP si legano a carboidrati specifici espressi sulla superficie batterica, formando complessi VLP-batteri.
Centrifugare per pellettare i complessi e scartare le VLP non legate.
Introdurre una soluzione bloccante contenente proteine per bloccare i siti di legame degli anticorpi non specifici, riducendo la colorazione di fondo nelle fasi successive.
Aggiungere anticorpi specifici VLP marcati in fluorescenza e incubare.
Gli anticorpi si legano ai loro siti bersaglio sul capside VLP, marcando i complessi VLP-batteri.
Centrifuga per pellettare i complessi. Scartare gli anticorpi non legati e risospendere il pellet in un tampone per citometria a flusso.
Utilizzando un citometro a flusso, è possibile rilevare i segnali di fluorescenza emessi dai complessi VLP-batteri, consentendo la quantificazione della percentuale di batteri legati nel campione.
Dopo aver preparato i reagenti, gli anticorpi e i
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