Un test immunologico per elettroforesi capillare per il rilevamento di biomarcatori proteici
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 7:32 min. • July 8th, 2025
Per rilevare un biomarcatore proteico associato alla malattia, prelevare una piastra di dosaggio immunologico.
La piastra contiene le matrici di separazione e impilamento preriempite necessarie per la separazione delle proteine in base alle dimensioni.
Caricare le proteine e i reagenti per il dosaggio immunologico in pozzetti di piastre distinti.
Avviare l'esecuzione all'interno di un analizzatore CEI. La cartuccia capillare nell'analizzatore aspira le matrici per formare un gel all'interno di ciascun capillare.
Il capillare aspira quindi le proteine. Durante l'elettroforesi, le proteine migrano e si separano in base al loro peso molecolare.
L'analizzatore introduce la luce UV, immobilizzando le proteine nel capillare.
Il tampone di lavaggio rimuove le matrici e le proteine non legate. Il buffer di blocco quindi fluisce all'interno, bloccando siti di interazione non specifici.
L'analizzatore introduce gli anticorpi primari che si legano al biomarcatore, seguiti dagli anticorpi secondari coniugati con perossidasi che interagiscono con gli anticorpi primari.
Lavare e quindi aggiungere il substrato di chemiluminescenza. La perossidasi ossida il substrato, emettendo luminescenza.
Misur
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