JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:19 min. • July 8th, 2025
Iniziare con un vetrino contenente cellule ospiti aderenti.
Aggiungi virus e consenti loro di entrare nelle cellule ospiti.
Rimuovere il mezzo esaurito. Aggiungere terreno fresco per consentire la sintesi e il trasporto delle proteine virali.
Utilizzare la paraformaldeide per preservare la morfologia cellulare e la posizione delle proteine.
Aggiungere molecole di detersivo per rendere le cellule permeabili.
Applicare un buffer di blocco per bloccare i siti di associazione non di destinazione.
Aggiungere gli anticorpi primari che legano le proteine virali bersaglio. Rimuovere gli anticorpi non legati.
Sovrapposizione con anticorpi secondari rossi coniugati con fluorofori per marcare in fluorescenza le proteine virali. Rimuovere gli anticorpi non legati.
Aggiungere un mezzo di montaggio fluorescente contenente colorante nucleare per colorare i nuclei.
Utilizzando la microscopia confocale, osservare la posizione delle proteine virali fluorescenti rosse e dei nuclei ospiti fluorescenti blu.
Un segnale rosso più forte intorno all'area blu indica la localizzazione citoplasmatica, mentre un segnale più forte all'interno suggerisce la localizzazione nucleare.
Livelli di segnale uguali all'
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