Un metodo in vitro per identificare le cellule immunitarie innate e adattative che risiedono nei polmoni murini

Prelevare il tessuto polmonare murino tritato in un tampone di digestione e incubarlo a una temperatura fisiologica.

Gli enzimi tampone scompongono la matrice tissutale, allentando le cellule.

Triturare per dissociare la massa cellulare e filtrare la sospensione utilizzando un colino per isolare le singole cellule.

Centrifugare per rimuovere il surnatante con i detriti di tessuto. Incubare le cellule con un tampone di lisi per lisare i globuli rossi.

Centrifugare per scartare il surnatante contenente detriti cellulari. Risospendere le cellule e trasferirle su una micropiastra.

Aggiungere anticorpi per bloccare i recettori Fc, prevenendo la colorazione di fondo.

Introdurre un cocktail di anticorpi marcati con fluorofori mirati a specifici marcatori di superficie sulle cellule immunitarie innate: monociti, macrofagi, cellule dendritiche, cellule natural killer, neutrofili, eosinofili e cellule immunitarie adattative, linfociti B e T.

Fissare e permeabilizzare le cellule. Aggiungere anticorpi marcati con fluorofori specifici per un marcatore intracellulare su monociti, macrofagi, cellule dendritiche ed eosinofili.

Utilizzando la citometria a flusso, classificare le cellule immunitarie