Misurazione dei livelli di immunoglobulina G rispetto a un vaccino di prova in un siero di topo

Iniziare con una piastra multipozzetto rivestita con un vaccino di prova e bloccare i siti di interazione non specifici.

Acquisire un campione di siero da un topo a cui è stato iniettato il vaccino di prova.

Questo siero contiene immunoglobuline G, o IgG, anticorpi che riconoscono il vaccino di prova.

Ai pozzetti rivestiti di vaccino, aggiungere campioni di siero diluiti in serie.

Le IgG si legano al vaccino. Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati.

Aggiungere anticorpi secondari coniugati con perossidasi che si legano alle IgG. Rimuovere gli anticorpi secondari non legati.

Aggiungere un substrato cromogenico. La perossidasi interagisce con il substrato, generando un prodotto di colore blu.

Introdurre un acido per fermare la reazione. La variazione del pH fa ingiallire la soluzione.

Utilizzando uno spettrofotometro, misurare l'intensità del colore di ciascun pozzetto per determinare la concentrazione di IgG nel campione di siero.

Per il rivestimento dell'antigene del saggio di immunoassorbimento enzimatico, o piastra ELISA, diluire l'antigene della proteina HI a 10 microgrammi per millilitro con una soluzione di rivestimento e aggiungere 100 microlitri di antigene diluito per