JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:34 min. • July 8th, 2025
Inizia con cellule di mammifero infettate da virus che producono più caspasi, inclusa la caspasi-3.
Aggiungere un terreno di coltura al pozzetto di controllo e un terreno integrato con inibitore della caspasi-3 al pozzetto del test.
Nel pozzetto di controllo, la caspasi-3 riconosce e degrada le nucleoproteine virali e le proteine dell'ospite essenziali per la propagazione virale.
Nel pozzetto del test, l'inibitore entra nella cellula, inibendo l'attività della caspasi-3 e prevenendo la degradazione delle proteine.
Staccare le celle dalla piastra. Aggiungere un reagente lisanti e riscaldare per indurre la lisi cellulare, rilasciando proteine intracellulari.
Caricare entrambi i campioni su un gel di poliacrilammide SDS e su un elettroforese per separare le proteine in base alle dimensioni.
Dopo l'elettroforesi, trasferire il gel su una membrana assorbente.
Trattare la membrana con anticorpi primari contro le nucleoproteine virali e le proteine dell'ospite.
Lavare e sovrapporre con anticorpi secondari coniugati con fluorofori che si legano agli anticorpi primari, generando bande fluorescenti.
La maggiore fluorescenza nel campione di prova indica una ridotta scissione virale e proteica
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