Name: Tecnica modificata di legatura dellarteria coronarica in Mouse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-29T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: Impara la tecnica modificata di legatura dell'arteria coronarica nel topo per creare un modello di infarto miocardico. Questo metodo chirurgico consente di studiare la funzione cardiaca e valutare nuove terapie cardiovascolari.

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1. Protocollo di testo <ol><li> Prima di procedere alla chirurgia, anestetizzare un topo maschio (C57BL / 6) che è di 6 settimane di età o più anziani per inalazione del 2-5% isoflurano. Eseguire un pizzico punta a confermare che l&#39;animale è sufficientemente anestetizzato. </li><li> Il mouse inconscio è posto sul dorso su un pad calda per mantenere una temperatura costante di 37 ° C. Il petto precordiale sul lato sinistro è rasata. </li><li> Fissare il mouse per un dispositivo di intubazione con isoflurano camera piena. Inserire un tubo di 0,2 diametro interno nella trachea del topo attraverso la bocca, poi posizionare il mouse intubato su un&#39;area asettica chirurgico (37 ° C da un controllore di temperatura) e collegare il tubo endotracheale ad un ventilatore (tasso di 120 per min, pressione di 4-6 mmH 2 O); disinfettare la zona con Betadine e 75% di etanolo. </li><li> Applicare una pomata oftalmica agli occhi del topo. Posizionare standard di elettrodi ECG sulle zampe e collegare il mouse al registratore ECG. </li&gt; <li> Utilizzare le forbici sterili per fare un 1,5 centimetri un&#39;incisione lungo la linea ascellare media. Forbici sono utilizzati piuttosto che un bisturi per evitare lesioni al tessuto sottostante nei topi. Quindi, utilizzare le forbici punta smussa-vaso di sezionare e ritrarre il muscolo precordiale dalla parete toracica. </li><li> Eseguire una toracotomia sinistra tra le costole terzo e il quarto per visualizzare la superficie anteriore del cuore e del polmone sinistro </li><li> Retrarre ulteriormente la parete toracica utilizzando un riavvolgitore adatto per migliorare la visualizzazione e l&#39;accessibilità. Rimuovere il pericardio utilizzando pinze dentate e punta smussata forbici. </li><li> Legare l&#39;arteria coronaria sinistra posizionando l&#39;ago (fissato con sutura 7-0 Ethilon) sotto l&#39;arteria con una banda di miocardio tra la legatura e l&#39;arteria. Un successo di occlusione coronarica è verificata da ipocinesia / akinesis della parete anteriore del ventricolo sinistro e dalle alterazioni di registrazione ECG (ad esempio innalzamento del tratto ST, QRS broadening) </li><li> Chiudere il petto ponendo due punti (6-0 sutura Ethilon) sulle nervature terzo e quarto. </li><li> Utilizzare 5-0 Ethilon sutura per chiudere la pelle. </li><li> Per analgesia post-operatoria, somministrare una singola iniezione intraperitoneale di buprenorfina (0,05 mg / kg). Gli animali spontaneamente recuperare entro 2-5 minuti dopo l&#39;interruzione anestesia isoflurano. Infine, posizionare il mouse in una gabbia calda e fornire 0,6 mg / ml di buprenorfina in acqua potabile (sovrapposizione di testo: 0,6 mg / ml in acqua potabile) per prevenire post-operatorio. Seguire da vicino il mouse per le prime 24 ore dopo l&#39;intervento. </li><li> L&#39;ecocardiografia è eseguita per valutare la funzione cardiaca 3 giorni dopo infarto miocardico. Procedura di successo è verificato da acinesia nella parete anteriore del ventricolo sinistro (vedere il video allegato nei risultati). Alla fine dell&#39;esperimento, il cuore saranno raccolti e conservati in-80oC per ulteriori investigazioni. Genica ie. </li></ol>

<ol><li>Tabrizchi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-blocker+therapy+after+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev.+Cardiovasc.+Ther%22%5BJournal%5D)">Beta-blocker therapy after acute myocardial infarction.</a> Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 11, 293-296 (2013).</li>
<li>Pell, S., Fayerweather, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+the+incidence+of+myocardial+infarction+and+in+associated+mortality+and+morbidity+in+a+large+employed+population%2C+1957-1983%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Trends in the incidence of myocardial infarction and in associated mortality and morbidity in a large employed population, 1957-1983.</a> N. Engl. J. Med. 312, 1005-1011 (1985).</li>
<li>Ramunddal, T., Gizurarson, S., Lorentzon, M., Omerovic, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiarrhythmic+effects+of+growth+hormone--in+vivo+evidence+from+small-animal+models+of+acute+myocardial+infarction+and+invasive+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Electrocardiol%22%5BJournal%5D)">Antiarrhythmic effects of growth hormone--in vivo evidence from small-animal models of acute myocardial infarction and invasive electrophysiology.</a> J. Electrocardiol. 41, 144-151 (2008).</li>
<li>Thom, T., Haase, N., Rosamond, W., Howard, V. J., Rumsfeld, J., Manolio, T., Zheng, Z. J., Flegal, K., O'Donnell, C., Kittner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2006+update%3A+A+report+from+the+american+heart+association+statistics+committee+and+stroke+statistics+subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2006 update: A report from the american heart association statistics committee and stroke statistics subcommittee.</a> Circulation. 113, 85-151 (2006).</li>
<li>van den Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+cryoinjury-induced+myocardial+infarction+in+the+mouse%3A+A+comparison+with+coronary+artery+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: A comparison with coronary artery ligation.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 289, 1291-1300 (2005).</li>
<li>Omerovic, E., Ramunddal, T., Lorentzon, M., Nordlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+neuropeptide+y2+receptor+blockade+on+ventricular+arrhythmias+in+rats+with+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of neuropeptide y2 receptor blockade on ventricular arrhythmias in rats with acute myocardial infarction.</a> Eur. J. Pharmacol. 565, 138-143 (2007).</li>
<li>Ahn, D., Cheng, L., Moon, C., Spurgeon, H., Lakatta, E. G., Talan, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myocardial+infarcts+of+a+predictable+size+and+location+by+branch+pattern+probability-assisted+coronary+ligation+in+c57bl%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in c57bl/6 mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, 1201-1207 (2004).</li>
<li>Lindbom, M., Ramunddal, T., Camejo, G., Waagstein, F., Omerovic, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+effects+of+myocardial+creatine+depletion+on+left+ventricular+function+morphology+and+lipid+metabolism%3A+Study+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Card+Fail%22%5BJournal%5D)">In vivo effects of myocardial creatine depletion on left ventricular function morphology and lipid metabolism: Study in a mouse model.</a> J. Card Fail. 14, 161-166 (2008).</li>
<li>Omerovic, E., Bollano, E., Basetti, M., Kujacic, V., Waagstein, L., Hjalmarson, A., Waagstein, F., Soussi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic%2C+functional+and+morphological+consequences+of+postinfarct+cardiac+remodeling+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic, functional and morphological consequences of postinfarct cardiac remodeling in the rat.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 31, 1685-1695 (1999).</li>
<li>Gao, E., Lei, Y. H., Shang, X., Huang, Z. M., Zuo, L., Boucher, M., Fan, Q., Chuprun, J. K., Ma, X. L., Koch, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+efficient+model+of+coronary+artery+ligation+and+myocardial+infarction+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse.</a> Circ. Res. 107, 1445-1453 (2010).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

La procedura chirurgica per la LCA legatura come dimostrato in questa relazione è un metodo affidabile e riproducibile per l&#39;induzione di infarto miocardico sperimentale nei topi 3, 6. La legatura di LCA secondo questo protocollo induce ischemia miocardica impegnarsi in genere circa il 40% del ventricolo sinistro 3. Questo induce significativi cambiamenti ECG nel segmento ST 7 e pallore visibile sulla superficie anteriore del cuore. A causa del grande infarto del miocardio, la mortal...

tecnica modificata di legatura dell&#39;arteria coronarica in mouse

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Infarto del miocardio (MI) è una delle più importanti cause di mortalità negli esseri umani 1-3. Al fine di migliorare la morbilità e la mortalità nei pazienti con infarto miocardico che dobbiamo migliore conoscenza fisiopatologia di ischemia miocardica. Questa conoscenza può essere utile per definire nuovi bersagli terapeutici per le innovative terapie cardiovascolari 4. Sperimentale modello MI nei topi è un sempre più popolare piccoli animali modello nella ricerca preclinica in cui è indotta MI mediante legatura permanente o temporanea di sinistra dell&#39;arteria coronaria (LCA) 5. In questo video, si descrive il passo-passo di come metodo per indurre MI sperimentale nei topi. L&#39;animale è anestetizzato prima con 2% isoflurano. Il mouse inconscio viene intubato e collegato ad un ventilatore per la ventilazione artificiale. Il lato sinistro del petto è rasato e 1,5 cm lungo incisione ascellare metà linea è realizzata in pelle. Il muscolo grande pettorale sinistra è senza mezzi termini dissocIATED finché le nervature sono esposti. Gli strati muscolari sono tirato da parte e fissato con una palpebra-divaricatore. Dopo queste preparazioni, toracotomia sinistra viene eseguita tra le costole terzo e quarto per visualizzare la superficie anteriore del cuore e polmone sinistro. Il segmento prossimale dell&#39;arteria LCA viene poi legato con una sutura 7-0 Ethilon che induce tipicamente un infarto dimensione ~ 40% del ventricolo sinistro. Alla fine, la cassa è chiusa e gli animali ricevono postoperatoria (Temgesic, 0,3 mg/50 ml, ip). Gli animali sono tenuti in una gabbia caldo fino a recupero spontaneo.

<table border="1"><tbody><tr><td> Strumento </td><td> Descrizione delle funzioni </td></tr><tr><td> Blunt-punta forbici </td><td> Usato per tagliare la pelle, muscolo toracico intercostale, e suture </td></tr><tr><td> Eye divaricatore </td><td> Usato per esporre vista chirurgico </td></tr><tr><td> Blunt-punta pinza </td><td> Usato per afferrare la pelle e muscoli </td></tr><tr><td> Porta aghi </td><td> Per tenere un ago </td></tr><tr><td> 5-0 sutura </td><td> Utilizzato per suturare la pelle </td></tr><tr><td> ...

La procedura chirurgica utilizzata per indurre infarto miocardico sperimentale in topi inizia con toracotomia sinistra tra il terzo e il quarto nervature per visualizzare la superficie anteriore del cuore e polmone sinistro. Coronaria sinistra viene ligato, il torace è chiuso e il mouse viene consentito di recuperare spontaneamente.

Tecnica modificata di legatura dell&#39;arteria coronarica in Mouse

L'infarto del miocardio (IM) è una delle cause di mortalità più importanti nell'uomo1-3. Al fine di migliorare la morbilità e la mortalità nei pazienti affetti da IM...

Lo scopo generale di questa procedura è indurre un infarto miocardico nei topi. Questo viene ottenuto effettuando innanzitutto un'incisione cutanea lungo la linea ascellare media. Successivamente, il cuore viene esposto mediante una toracotomia a sinistra tra la terza e la quarta costa.Successivamente viene effettuata una legatura nel segmento prossimale dell'arteria discendente anteriore sinistra. Infine, il torace viene chiuso e il topo viene riposizionato nella gabbia per un recupero spontaneo. In ultima analisi, l'infarto miocardico può essere esaminato mediante elettrocardiografia o ecocardiografia.La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale poiché la legatura dell'arteria coronaria vicina al ventricolo sinistro è difficile da apprendere. Un'infezione miocardica adeguata viene garantita posizionando la legatura appena al di sotto dell'orifizio del ventricolo sinistro. Tuttavia, è importante non perforare l'arto ascendente del ventricolo sinistro poiché potrebbe causare emorragia letale.Per iniziare l'intervento chirurgico, anestetizzare un topo di età pari o superiore a sei settimane mediante inalazione di fluoruro al 2-5%. Eseguire una compressione del dito del piede per confermare che l'animale sia sufficientemente anestetizzato. Una volta che il topo è completamente sedato, trasferirlo nell'area chirurgica e posizionarlo su.Posizionare il dorso su un tappetino riscaldato. Per mantenere una temperatura costante di 37 gradi Celsius, fissare il topo a un dispositivo di intubazione dotato di una camera per isoflurano con un tubo di diametro di 0,2 centimetri e una miscela di 2% di isoflurano in aria. Inserire il tubo nella trachea del topo.Rasare il torace precordiale sul lato sinistro, quindi disinfettare l'area con Betadine. Successivamente, ripetere l'operazione con etanolo al 75% per tre volte. Applicare inoltre un unguento oftalmico agli occhi del mouse utilizzando forbici sterili.Eseguire un'incisione di 1,5 centimetri lungo la linea ascellare media. Questo approccio facilita la successiva valutazione ecocardiografica. Si utilizzano forbici anziché un bisturi per evitare lesioni ai tessuti sottostanti in questi topi giovani.Quindi, utilizzando pinze vascolari con punta smussata, dissociare e ritrarre il muscolo precardiaco dalla parete toracica. Eseguire una toracotomia a sinistra tra la terza e la quarta costola per visualizzare la superficie anteriore del cuore e del polmone sinistro. Successivamente, ritrarre la parete toracica utilizzando un retrattore per palpebra adatto.Per migliorare la visualizzazione e l'accessibilità utilizzando pinze da dentista e forbici a punta smussata, rimuovere il pericardio. Successivamente, preparare un filo di sutura e un ago di calibro 7-0 per la legatura dell'arteria. Legare l'arteria coronaria sinistra posizionando l'ago al di sotto dell'arteria, con una fascia di miocardio tra la legatura e l'arteria.Chiudere il torace posizionando due punti di sutura sulle terza e quarta costola. Ridurre la concentrazione di isoflurano allo 0,5% e utilizzare tre punti di sutura con filo etilene 5-0 per chiudere la cute. Per l'analgesia postoperatoria, somministrare un'iniezione intraperitoneale di 0,05 milligrammi per chilogrammo di buprenorfina.Infine, posizionare il topo in una gabbia riscaldata per il recupero spontaneo e fornire 0,6 milligrammi per millilitro di buprenorfina nell'acqua da bere. Monitorare attentamente il topo nelle prime 24 ore successive all'intervento chirurgico per valutare gli effetti dell'infarto miocardico. Il metodo migliore invasivo consiste nel valutare la funzione cardiaca mediante ecocardiografia alcuni giorni dopo l'intervento chirurgico.Utilizzando questo protocollo, la legatura dell'arteria coronaria sinistra induce un'ischemia miocardica che interessa circa il 40% del ventricolo sinistro. Questo provoca significative alterazioni dell'ECG nel tratto ST, come mostrato in questi ECG rappresentativi registrati prima e dopo la legatura. Prima dell'infarto miocardico.I complessi QRS registrati con l'ECG sono stretti e brevi. Dopo un infarto miocardico, si osserva un evidente rialzo del segmento ST che si fonde nei complessi QRS, rendendo questi ultimi molto più ampi e alti rispetto a quelli registrati prima dell'infarto miocardico. Per studiare gli effetti dell'infarto miocardico, valutare la funzione cardiaca mediante ecocardiografia alcuni giorni dopo l'intervento di infarto miocardico.Qui è mostrata una registrazione ecocardiografica ottenuta da topi sottoposti a intervento fittizio. A differenza delle buone contrazioni cardiache osservate nei topi sottoposti a intervento fittizio, nei topi con infarto miocardico.72 ore dopo l'infarto miocardico, è evidente un'akinèsia nella parete ventricolare libera sinistra durante la fase sistolica. Dopo aver visto questo filmato, si dovrebbe avere una buona comprensione di questo modello murino di infarto miocardico e si dovrebbe essere in grado di riprodurlo nel proprio laboratorio.

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Questo video illustra come utilizzare un modello veloce e affidabile per lo studio dei processi fisiopatologici pathobiological e di ischemia miocardica.

LAD-Legatura: un modello murino di infarto miocardico

Numerose manipolazioni genetiche e / o iniezioni intramiocardiche di geni, proteine, cellule e / o biomateriali si sovrappongono la dimensione del tempo negli studi di acuta ischemia / riperfusione e rimodellamento cronica nel topo. Questo video illustra le procedure di microchirurgia per ischemia / riperfusione, permanente legatura delle arterie coronarie, e gli studi di iniezione intramiocardico.

Legatura dell&#39;arteria coronarica e di iniezione intramiocardico in un modello murino di infarto

In questo video, descriviamo una procedura chirurgica per generare un modello murino di infarto del miocardio legando in modo permanente l'arteria coronaria discendente anteriore sinistra.

Generazione di un modello murino di infarto del miocardio: una procedura chirurgica per la legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra in un modello murino

Si introduce un metodo chirurgico per indurre sperimentale ischemia / riperfusione (I / R) pregiudizio per simulare infarto del miocardio (MI) in modelli murini che consente una maggiore chiarezza posizionamento della legatura sulla discendente anteriore sinistra (LAD) per migliorare la riproducibilità di esperimenti MI nei topi.

Un modello murino di ischemia miocardica e riperfusione lesioni da legatura della arteria discendente anteriore sinistra

Viene descritto un modello altamente riproducibile per l'infarto del miocardio nei topi con manipolazioni minimamente invasive. Il modello può essere facilmente eseguito, con conseguente elevata riproducibilità e tasso di sopravvivenza. Pertanto, il modello descritto ridurrà il numero di animali necessari come richiesto dal principio delle 3R (Sostituzione, Perfezionamento e Riduzione).

Minimal procedura chirurgica invasiva di indurre infarto miocardico nei topi

L'insufficienza cardiaca è la principale causa di ospedalizzazione e una delle principali cause di mortalità. Un modello di legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra nei topi è stato applicato per studiare il rimodellamento ventricolare e la disfunzione cardiaca post-infarto del miocardio. Viene presentata la tecnica delle misurazioni emodinamiche invasive nei topi.

Legatura permanente dell&#39;arteria discendente anteriore sinistra coronarica nei topi: un modello di post-infarto rimodellante miocardico e insufficienza cardiaca

Forniamo un metodo affidabile per la legatura dell'arteria discendente anteriore sinistra (LAD) in un modello murino. Questo metodo è relativamente meno invasivo di altri metodi, che coinvolgono l'intubazione endotracheale, un approccio di toracotomia sul lato sinistro e la toracentesi. Questo metodo può essere utilizzato come modello per l'infarto miocardico acuto e cronico.

Murino discendente anteriore sinistra (LAD) Coronary legatura dell&#39;arteria: una migliore e semplificata del modello di infarto miocardico

Qui descriviamo una procedura chirurgica che mostra come ottenere una legatura permanente dell'arteria coronaria discendente sinistra-anteriore nei topi. Questo modello è di grande rilevanza per studiare la fisiofisiologia dell'infarto miocardico e i processi biologici concomitanti.

Modello di infarto miocardico Murine utilizzando la legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra

In anestesia adeguata, il cuore del topo è stato esternalizzato attraverso lo spazio intercostale e l'infarto del miocardio è stato indotto con successo legando l'arteria discendente anteriore sinistra (LAD) utilizzando materiali prontamente disponibili nella maggior parte dei laboratori.

Un metodo semplice modificato per l'induzione dell'infarto miocardico nei topi

Qui descriviamo un metodo semplice e riproducibile che può indurre infarto miocardico o danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi mediante legatura di precisione dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra attraverso la micromanipolazione.

Induzione di infarto miocardico e danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi

Presentato qui è una procedura chirurgica per la legatura permanente dell'arteria coronaria sinistra nei topi. Questo modello può essere utilizzato per studiare la fisiopatologia e la risposta infiammatoria associata dopo infarto miocardico.

Legatura coronaria sinistra: un modello chirurgico murino di infarto miocardico

Impara la tecnica modificata di legatura dell'arteria coronarica nel topo per creare un modello di infarto miocardico. Questo metodo chirurgico consente di studiare la funzione cardiaca e valutare nuove terapie cardiovascolari.

Tecnica modificata di legatura dell'arteria coronarica in Mouse

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