Cellule CAR T geneticamente modificate utilizzando un sistema CRISPR-Cas9

Iniziare con una sospensione di cellule T e trattarle con lentivirus CAR che trasportano un gene per il recettore chimerico dell'antigene o lentivirus CAR e CRISPR.

Il lentivirus CRISPR contiene geni per l'RNA guida e la nucleasi Cas9, nonché un gene di resistenza agli antibiotici.

Sia i lentivirus CAR che CRISPR interagiscono con le cellule T e rilasciano il loro RNA.

Questi RNA vengono trascritti inversamente e convertiti nel DNA corrispondente, che si integra nel DNA delle cellule T.

Ciò consente la sintesi di proteine CAR, RNA guida e proteine Cas9.

L'RNA guida forma un complesso con Cas9, che riconosce e si lega specificamente al gene bersaglio sul DNA delle cellule T.

Nel frattempo, Cas9 sfende il DNA, creando una rottura a doppio filamento.

Questa rottura viene riparata tramite l'unione di estremità non omologa, un meccanismo di riparazione soggetto a errori, con conseguente modifica del gene bersaglio.

Questo genera cellule T geneticamente modificate con recettori chimerici dell'antigene.

Trattare le cellule con antibiotici per eliminare le cellule T non modificate e isolare selettivamente le cellule CAR T geneticamente modificate.

Per interrompere il fattore stimolante le