JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 1:49 min. • July 8th, 2025
Prendi una piastra a più pozzetti contenente sferoidi del cancro del colon-retto in un terreno di crescita.
Gli sferoidi sono aggregati tridimensionali di cellule tumorali che assomigliano al microambiente tumorale fisiologico.
Rimuovere il terreno di coltura e aggiungere concentrazioni crescenti di Lactobacillus cell-free surnatant, o LCFS, il surnatante di coltura ottenuto da una coltura di Lactobacillus, un batterio del tratto digestivo.
La LCFS è priva di cellule batteriche, ma contiene metaboliti attivi con attività antitumorale secreti dai batteri.
I metaboliti batterici nella LCFS interagiscono con le cellule tumorali nello sferoide, inducendo l'apoptosi e portando alla morte cellulare.
Il danno alle cellule provoca l'interruzione della morfologia sferoide.
Utilizzando un microscopio, esaminare gli sferoidi trattati con LCFS per osservare un aumento della morte cellulare con l'aumentare della concentrazione di LCFS, indicando l'attività antitumorale dose-dipendente dei metaboliti batterici.
Per il trattamento LCFS, diluire in serie la soluzione madre LCFS scongelata preparata in un terreno di crescita fresco a concentrazioni del 25%, 12,5 e 6% e utilizzare una pipetta da 200 microlitri per rimuovere con cura la maggior quantità possibile di surnatante da ciascun pozzetto delle colture di linee cellulari di cancro colorettale piazze.
Quindi aggiungere delicatamente 200 microlitri di terreno di crescita integrato con LCFS in triplicato a ciascun set di cellule tumorali e rimettere la piastra nell'incubatore per altre 24-48 ore.