Una tecnica per la generazione di cellule T CAR antigene-specifiche
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:32 min. • July 8th, 2025
Prendere una piastra a micropozzetti rivestita con frammenti di fibronectina ricombinante e aggiungere cellule T CD8-positive murine attivate.
Introdurre vettori retrovirali contenenti un RNA transgenico che codifica per un recettore chimerico dell'antigene o CAR.
Copri il piatto e sigillalo in un sacchetto per evitare contaminazioni. Centrifugare la piastra a bassa velocità per facilitare l'interazione virus-cellula.
La fibronectina si lega al virus e alla cellula, colocalizzandoli per migliorare il trasferimento genico mediato dal virus.
Dopo la centrifugazione, rimuovere la sacca sigillata e incubare la piastra in condizioni fisiologiche.
L'involucro del vettore virale si fonde con la membrana cellulare, rilasciando l'RNA virale e gli enzimi.
Gli enzimi virali trascrivono l'RNA rilasciato e integrano il DNA risultante nel genoma ospite, consentendo alle cellule di esprimere i CAR legati alla superficie.
Il CAR comprende un dominio di legame dell'antigene specifico per l'antigene bersaglio e domini di segnalazione per l'attivazione delle cellule T.
Le cellule CAR T antigene-specifiche sono pronte per i saggi a valle.
Il giorno 1, preparare piastre rivestite di frammenti di fibron
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