Generazione di progenitori neurali da cellule staminali embrionali in colture monostrato prive di siero

Inizia con una coltura di cellule staminali embrionali di topo.

Lavare le celle con un tampone per rimuovere i terreni e i detriti cellulari.

Aggiungere un cocktail enzimatico per staccare le cellule dalla superficie del pallone.

Aggiungere terreni per fermare l'attività enzimatica e raccogliere le cellule in una provetta. Centrifugare ed eliminare il surnatante contenente enzimi.

Risospendere le cellule in terreni di coltura neuronale privi di siero.

Seminare le cellule su pozzetti per piastre multipozzetto rivestiti di gelatina.

incubare. Le cellule staminali embrionali aderiscono alla superficie rivestita di gelatina. I costituenti dei mezzi, tra cui nutrienti, fattori di crescita e ormoni, facilitano la proliferazione cellulare e formano un monostrato.

A questa densità cellulare, le cellule staminali embrionali producono e rilasciano livelli ottimali di fattori di crescita e citochine.

Queste molecole innescano vie di segnalazione intracellulare, facilitando la differenziazione delle cellule staminali embrionali in progenitori neurali.

Mescolare la gelatina con 500 millilitri di PBS caldo e coprire il fondo del contenitore per colture cellulari con una quantità di soluzione suf