Stabilire una coltura tridimensionale di cellule gliali derivate dal cervello di ratto

Prendi una micropiastra con una coltura aderente di cellule gliali derivate da un cervello di ratto. La coltura contiene astrociti, microglia e oligodendrociti.

Rimuovere il terreno, incubare con una soluzione enzimatica per staccare le cellule, quindi trasferirle in una provetta.

Centrifugare e rimuovere il surnatante con i detriti cellulari. Risospendere le cellule in un mezzo caldo.

Triturare con una siringa per rompere i grumi cellulari e filtrare con un colino per ottenere una sospensione unicellulare.

Aggiungi un biopolimero fotoreticolabile, agenti reticolanti e componenti della matrice extracellulare.

Versare il composto in uno stampo attaccato a un vetrino coprioggetti. Esporre la miscela alla luce ad alta intensità per indurre la reticolazione, formando un gel e incapsulando le cellule gliali.

Togliete lo stampo e mettete i vetrini coprioggetti in una micropiastra. Aggiungere un terreno caldo e incubare il gel in condizioni fisiologiche.

Le cellule proliferano all'interno della matrice extracellulare di supporto e creano una rete cellulare, stabilendo una coltura tridimensionale di cellule gliali.

24 ore prima dell'incapsulamento cellulare, aspirare il terreno da colture