Isolamento di colonie di cellule progenitrici neurali indotte derivate da fibroblasti umani adulti

Inizia con una coltura aderente di colonie di cellule progenitrici neurali indotte derivate da fibroblasti umani adulti in una piastra multipozzetto rivestita di laminina.

Lavare le colonie con un tampone per rimuovere le cellule non aderenti, quindi aggiungere un tampone fresco.

Raschiare intorno alle singole colonie per rimuovere le cellule circostanti.

Trasferire le colonie in pozzetti freschi rivestiti di laminina contenenti terreno di neuroinduzione.

Disaggregare meccanicamente le colonie per ottenere una sospensione unicellulare.

La laminina, una proteina della matrice extracellulare, interagisce con le proteine di superficie dei progenitori, facilitando l'adesione cellulare alla superficie del pozzetto.

Aggiungere un inibitore di piccole molecole che entra nelle cellule e blocca specifiche protein chinasi, prevenendo l'apoptosi cellulare.

I fattori di crescita e le piccole molecole presenti nel mezzo di neuroinduzione facilitano la proliferazione dei progenitori.

Sostituire periodicamente il terreno per reintegrare i nutrienti, facilitando la continua proliferazione dei progenitori.

Una coltura confluente, o uno strato cellulare completamente coperto, indica il successo dell