Differenziazione delle cellule progenitrici neurali indotte in astrociti

Prelevare una coltura di cellule progenitrici neurali indotte, o iNPC, su una piastra multipozzetto rivestita di proteine della matrice extracellulare.

Sostituire il terreno con un terreno di induzione gliale e incubare. I fattori di crescita e gli ormoni nei terreni facilitano la differenziazione delle iNPC in cellule precursori gliali.

Cambiare i terreni a giorni alterni per la proliferazione cellulare. Quindi, sostituire il terreno con il terreno di coltura degli astrociti e incubare.

Nutrienti specifici e fattori di crescita nei terreni guidano la differenziazione delle cellule precursori gliali in astrociti.

I cambiamenti dei terreni a giorni alterni promuovono la maturazione degli astrociti.

Cambiare il terreno in neuro-diff-medium quando le cellule sono confluenti per circa il 70% e continuare a cambiare il mezzo a giorni alterni per tre settimane. Non dividere le cellule durante la differenziazione. Dopo tre settimane, le cellule dovrebbero esprimere il marcatore neuronale TuJ1.

Per ottenere neuroni e sottotipi neuronali più maturi, continuare la differenziazione fino a tre mesi. Per la differenziazione delle iNPC in modo specifico verso una linea gliale, cambiare il mezzo