JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:15 min. • July 8th, 2025
Inizia con una piastra multipozzetto rivestita di gelatina contenente cellule progenitrici neurali derivate da cellule staminali embrionali di topo in un mezzo di differenziazione basale ricco di sostanze nutritive.
Le cellule progenitrici utilizzano questi nutrienti dai terreni per mantenere la loro vitalità.
Incubare per consentire l'adesione delle cellule alla superficie rivestita di gelatina, quindi lavare per rimuovere le cellule e i detriti non attaccati.
Introdurre un terreno di differenziazione basale integrato con un agente stabilizzante, nutrienti aggiuntivi e fattori di crescita neurali cruciali per la differenziazione cellulare e quindi incubare.
Le cellule progenitrici consumano i nutrienti e i fattori di crescita, avviando la loro differenziazione in neuroni che iniziano ad estendere i loro processi cellulari.
Allo stesso tempo, l'agente stabilizzante interagisce con i metaboliti tossici e protegge i neuroni in via di sviluppo dal danno ossidativo, preservandone la vitalità.
Sostituire regolarmente il terreno per mantenere i livelli di nutrienti.
Nel corso del tempo, i neuroni maturano, sviluppando gli assoni, i processi cellulari più lunghi.
Inoltre, sviluppano anche dendriti, i processi cellulari più brevi, che confermano la differenziazione delle cellule staminali in neuroni.
Seminare circa 500.000 derivati di cellule staminali embrionali di topo in 2 millilitri di terreno di differenziazione basale per pozzetto sulle piastre rivestite di gelatina allo 0,1%. Dividere casualmente le derivate in tre gruppi per testare tre protocolli di differenziazione di fase II. Incubare la piastra per sei ore. Quindi, lavare le cellule due volte con 2 millilitri di PBS e aggiungere 2 millilitri di terreno di differenziazione basale, terreno N2 B27 1 o terreno N2 B27 2 a ciascun pozzetto, a seconda del protocollo. Posizionare le piastre nell'incubatrice e lasciare che le cellule si differenzino per altri 10 giorni, cambiando il terreno corrispondente ogni due giorni.