Un metodo di co-coltura per modellare le interazioni neurone-oligodendrocita
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:26 min. • July 8th, 2025
Prendiamo i neuroni indotti dall'uomo, o iNs, coltivati su una matrice extracellulare.
Rimuovi i terreni e aggiungi enzimi digestivi che interrompono la matrice, dissociando le cellule.
Trasferire gli iN in una provetta. Centrifugare la sospensione ed eliminare il surnatante contenente gli enzimi.
Risospendere gli iN in un terreno di co-coltura; trasferirli su una coltura di cellule precursori degli oligodendrociti indotte, o iOPC.
Gli iOPC sono precursori degli oligodendrociti che formano guaine mieliniche attorno agli assoni dei neuroni.
Dopo l'incubazione, gli iOPC formano connessioni sinaptiche con gli iNs. I fattori trofici rilasciati dalle iOPC e i fattori di crescita nel mezzo promuovono la maturazione delle iN nei neuroni, mostrando un aumento dei processi cellulari che formano connessioni sinaptiche con altri neuroni.
L'attività elettrica dei neuroni maturi e dei fattori di crescita nel mezzo induce la maturazione di iOPC in oligodendrociti.
Gli oligodendrociti estendono i processi cellulari, formando guaine mieliniche attorno agli assoni neuronali.
La co-cultura stabilita è pronta per l'analisi.
Il giorno 14, piastre iOPC a una densità di 1 x 105 celle per pozzetto in una
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