Isolamento di cellule staminali dal cervelletto di topo postnatale e differenziazione in cellule neurali

Prendi le cellule isolate da un cervelletto di topo neonato contenente cellule staminali, neuroni e glia.

Aggiungere microsfere magnetiche rivestite di anticorpi che si legano a una glicoproteina di superficie specifica per le cellule staminali.

Centrifugare, rimuovere le perle non legate e risospendere le cellule in un tampone.

Caricare le cellule su una colonna di separazione posta in un separatore magnetico, che trattiene le cellule staminali legate alle microsfere mentre le altre cellule fluiscono.

Aggiungere un mezzo di neurosfera per eluire le cellule e trasferirle in una micropiastra. Incubare per indurre la formazione di neurosfere primarie, colonie autorinnovanti di cellule staminali.

Centrifugare e scartare il terreno. Risospendere le neurosfere in un mezzo contenente enzimi per digerire le proteine di adesione cellulare.

Centrifugare e rimuovere gli enzimi. Aggiungere il mezzo della neurosfera e dissociare meccanicamente le cellule.

Incubare per consentire la proliferazione delle cellule staminali e la formazione secondaria della neurosfera, mentre le cellule differenziate prive delle caratteristiche delle cellule staminali non proliferano.

Trasferire le neurosfere in un