Isolamento di neuroni marcati in fluorescenza da un cervello murino

Prendiamo una corteccia di topo transgenica contenente neuroni fluorescenti che esprimono proteine.

Fissarlo su un portacampioni.

Montare il supporto sul vassoio del vibratomo contenente aCSF ossigenato per mantenere le condizioni fisiologiche del tessuto.

Utilizzando i parametri impostati, ottenere fette coronali.

Metti le fette in un supporto a rete contenente aCSF ossigenato e bloccanti dell'attività per stabilizzarle.

Trattare le fette con proteasi per digerire la matrice extracellulare e sciogliere le cellule.

Lavare con aCSF per rimuovere le proteasi.

Trasferire le fette su una piastra di coltura con aCSF e siero.

Sotto un microscopio a fluorescenza, sezionare le regioni della fetta contenenti neuroni fluorescenti.

Trasferire i frammenti sezionati in una provetta contenente aCSF e siero.

Dissociare meccanicamente il tessuto per formare una sospensione unicellulare. Trasferire le cellule in una piastra di coltura contenente aCSF.

Sotto un microscopio a fluorescenza, utilizzare una pipetta capillare per raccogliere i neuroni fluorescenti.

Dispensa questi neuroni in una piastra di coltura contenente aCSF per ulteriori analisi.

Seziona il cervello da un topo soppresso aprendo il