Stabilire una coltura cellulare gliale Müller ottenuta da retine di topo

Prendete le retine di topo contenenti cellule Müller Glial, o MG, e i neuroni.

Metterli in una soluzione di dissociazione con enzimi digestivi e incubare con un leggero dondolio per garantire una distribuzione uniforme degli enzimi.

Questi enzimi rompono la matrice extracellulare, staccando le singole cellule.

Pipetta le retine su e giù più volte per rilasciare le cellule.

Aggiungere un inibitore per arrestare l'attività enzimatica, quindi centrifugare.

Scartare il surnatante.

Risospendere le cellule in terreni contenenti un fattore di crescita specifico per le cellule MG.

Trasferire le cellule in un pozzetto e incubare.

Nel tempo, il fattore di crescita nei mezzi facilita la crescita e la moltiplicazione delle cellule MG mentre le cellule neuronali che non si dividono muoiono.

Rimuovere il supporto. Lavare con un tampone di sale.

Incubare con un enzima digestivo per staccare le cellule dal pozzetto.

Raccogliere le cellule in una provetta e poi centrifugare.

Scartare il surnatante contenente le cellule neuronali morte.

Risospendere le cellule MG in un terreno per ulteriori analisi.

Preparare la miscela di dissociazione papaina DNasi I come descritto nel manoscritto. Ora, con una pi