Name: Plasma Surface Patterning litografia per la creazione di reti di cella (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 58 s
Description: Impara la litografia al plasma per creare microambienti cellulari controllati e studiare il comportamento di singole cellule e gruppi cellulari. Questa tecnica versatile permette di formare reti cellulari che imitano i tessuti naturali.

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<p class="jove_content"&gt; Ringraziamo DD Zhang per la discussione penetranti e generosamente offrendo reagenti. MJ è supportato dal NIH cardiovascolare Formazione Grant, l&#39;Arizona Technology Fund Research Initiative, e ricompense Achievement per gli scienziati College. Questo lavoro è supportato da Innovator Award nuovo direttore NIH (1DP2OD007161-01), la National Science Foundation (0.855.890) e la James S. McDonnell Foundation.</p

1. Creazione di stampi utilizzati per patterning <ol><li> Progettazione concettuale di modelli. I modelli sono creati che servono a formare reti di cellule, cellule contatto di controllo, isolare le cellule, imitare strutture naturali, o comunque guida adesione cellulare e di collocamento. </li><li> Computer-aided design o la creazione del modello CAD base e la creazione di fotomaschere. Il modello desiderato è stato progettato in software CAD, come AutoCAD, e viene quindi inviato ad una società esterna per produrre un fotomaschere. </li><li> Fotolitografia per la produzione di modello master. Vetrini sono modellati sia con un sottile resistere positivo o negativo di spessore resistere a seconda delle dimensioni della struttura creata. Vetrini sono utilizzati per la loro vantaggi di essere a basso costo, più forte di wafer di silicio e non producono polveri tanto quando rotto. In alternativa, altre strutture utili come reticoli di diffrazione può essere utilizzato come il modello master. </li><li> La slitta fantasia è collegato a una pila di diapositive che non sono stati fantasia. Tutti i passaggi vengono eseguiti all'interno di una cappa a flusso pulito per ridurre al minimo la polvere. </li><li> Creazione di stampi master. Un contenitore di leggermente più grande della pila di diapositive stagnola è stato creato per tenere la 30 g di Polidimetilsilossano (PDMS) che viene poi versato sulla superficie photolithographically fantasia per creare uno stampo iniziale. Il PDMS è degassificati e lasciato asciugare per 1-2 giorni. </li><li> Una volta indurito il PDMS è staccata del modello maestro e forma uno stampo per il prossimo passo. </li><li> 6 g di 2 epossidica parte (Devcon # 14310 (6 g) viene miscelato per 1 minuto e poi versato nello stampo master, degassata e ha permesso di curare. Degasaggio la resina epossidica si deve fare in fretta (&lt;8 min) con bolla molti cicli di rottura e utilizzando soltanto un sottile strato prima che il set di resina epossidica e la rimozione bolla diventa impossibile rimuovere le bolle. Il 6 g usato produce uno strato sottile che facilita la rimozione rapida bolla. </li><li> Dopo un'ora, i 2 epossidica parte sarà curata in parte e più epossidica possono essere aggiunti in cima senza degassamento per produrre una struttura più spessa che è più facile da gestire nelle fasi successive. La resina epossidica viene poi lasciato asciugare per 1-2 giorni. </li><li> Una volta indurito, la resina viene rimosso dallo stampo maestro PDMS e nastro viene avvolto intorno allo stampo epossidica per formare un contenitore. Uno stampo di lavoro è poi creato versando PDMS sullo stampo epossidica, degasaggio il PDMS, e curando per uno o due giorni. </li><li> Una volta indurito, lo stampo di lavoro è staccata della resina epossidica e conservato per mantenere la pulizia. </li></ol> 2. Patterning di superfici con stampi per l'orientamento delle cellule <ol><li> Piccole sezioni dello stampo di lavoro sono tagliati fuori e messi su una piastra di Petri in polistirolo. Le posizioni di queste sezioni muffa sono etichettati. </li><li> Un treppiede è formato da piccole sezioni e ponderati per assicurare il contatto conformazionale tra lo stampo di lavoro e la superficie piastra di Petri. Buon piazzamento può essere osservato, cercando sul fondo del piatto. </li><li> L'assemblea è posizionato nella camera di plasma. Trattamento al plasma è iniziato e continuato a 150 Pa a 29,6 W (potenza massima) per 10 minuti, con aria plasma. </li><li> Dopo il trattamento al plasma, lo stampo e contestazione peso vengono rimossi. </li><li> La piastra di Petri è posto sotto la luce UV per 10 minuti di sterilizzazione all'interno del cabinet biosicurezza e memorizzate fino a quando seminati con cellule. </li></ol> 3. Semina delle superfici con le cellule <ol><li> SH-SY5Y CRL-2266 neuroblastoma umano o di altre cellule sono coltivate utilizzando protocolli standard per il tipo di cellula. </li><li> La confluenza del SH-SY5Y CRL-2266 cellule di neuroblastoma umano è misurato visivamente prima della semina sulla superficie modellata. </li><li> Divisione cellulare standard è effettuato per rimuovere le cellule dalla superficie della loro capsula di Petri. </li><li> Le cellule, galleggiante, una volta liberi, sono seminati sulla superficie del piatto modellato Petri dopo essere stato diluito per ottenere la confluenza desiderata quando posizionati sulla superficie modellata. </li><li> Le cellule sono ammessi ad insediarsi e attaccarsi alla superficie. </li><li> Il piatto modellato Petri viene incubata per diverse ore a diversi giorni, mentre le cellule montare sul modello creato dal plasma. </li><li> Quando la coltura delle cellule di neuroblastoma, l'acido retinoico (10 mM) si aggiunge ogni giorno al fine di indurre le cellule a differenziarsi in un neurone stato simile. L'aggiunta di acido retinoico è fatta al buio. </li><li> L'acido retinoico è aggiunto al giorno per diversi giorni, dopo di che la differenziazione sarà osservabile. </li><li> Media è sostituita ogni 3-4 giorni. </li></ol> 4. Osservazione e analisi <ol><li> Immagini periodico delle cellule vive o video sono tratte in modo da osservare il comportamento di cellule nel tempo. Per le immagini dal vivo, le cellule sono poste in un microscopio fase incubatore superiore che mantiene le cellule di CO a 37 ° C, 100% di umidità, e il 5% 2. Le cellule possono anche essere fissate e colorate per l'osservazione in fluorescenza </li><li le immagini o video delle celle che sono stati catturati vengono importati in un sistema di analisi e misurazioni effettuate tra il tasso crescita dimensioni cellule la velocit migrazione differenziazione l posizione specifiche proteine altri.></ol> 5. Rappresentante dei risultati: Un risultato tipico di attuare la tecnica litografica plasma è la formazione di un modello di cellule che assomiglia a una struttura arbitraria o naturale. Questo si vede nella figura 1a-b dove le linee e le reti di neuroni sono stati creati. Altri tipi di cellule possono essere usate così come visto in Figura 1c-d, che mostra le cellule umane endoteliali della vena ombelicale (HUVEC) e C2C12 cellule del muscolo scheletrico formando griglie. Materiali come il poli-L-lisina può anche essere modellato, Figura 1e per facilitare l'attaccamento di certi tipi di cellule e per altri usi. Nel caso dei neuroni mostrato, ciò che è stato creato sono reti di cellule che hanno le connessioni tra di loro. Questo riproduce ciò che avviene naturalmente nel cervello dove i neuroni hanno connessioni discrete tra cellule vicine che influenza il funzionamento del cervello. Con la creazione di una tale struttura in laboratorio, il numero, posizione, frequenza e altri fattori di connessioni possono essere sistematicamente controllata. Il risultato di queste arraignments può essere misurato visivamente e ingressi supplementari come chimico o la stimolazione elettrica può essere implementato per sondare il comportamento della rete. Un risultato negativo sarebbe un modello di invaso o incompleti o un campione contaminato. Un modello incomplete o ricoperte deriverebbe da semina il substrato sia con celle troppo pochi o troppi, che non avrebbe fornito il modello con una quantità ideale di cellule. Inoltre, se il motivo non è progettato correttamente (ad esempio, linee troppo stretta) le cellule non sarà in grado di attaccare e crescere con successo su di esso. Nel caso di un campione contaminato, pulizia adeguata non sarebbe stato mantenuto durante uno dei passaggi anche se questo è raro quando si segue proprio protocollo di coltura delle cellule a causa del fatto che il modello al plasma sterilizza anche il substrato. <img src="/files/ftp_upload/3115/3115fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Patterning di cellule e proteine.

<ol><li>Junkin, M., Watson, J., Vande Geest, J. P., Wong, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Template-Guided+Self-Assembly+of+Colloidal+Quantum+Dots+Using+Plasma+Lithography%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Mater%22%5BJournal%5D)">Template-Guided Self-Assembly of Colloidal Quantum Dots Using Plasma Lithography.</a> Adv Mater. 21, 1247-1251 (2009).</li>
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</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Il metodo di indagine cellulare presentato qui permette la creazione di modelli complessi di reti pluricellulari che mimano le strutture biologiche e fornisce un metodo per produrre stimoli che sono subcellulare in natura che facilita poi le indagini sia di comportamento delle cellule e le risposte raggruppate singola cellula a fattori ambientali. L&#39;utilizzo di questo metodo è semplice ma robusto come può essere rapidamente eseguita con apparecchiature a basso costo in laboratorio come la coltura cellulare. E &#39;anche fortemente cellulari sensibili, consente di osservare facilmente il comportamento risultante ed è per sua natura stabile per lunghi periodi di tempo, che permette di indagine il comportamento delle cellule lungo termine. Permette inoltre di una vasta gamma di esperimenti da eseguire in quanto è compatibile con molti tipi di cellule e possono creare modelli di arbitrario. La stabilità a lungo termine della tecnica deriva dal fatto che la funzionalizzazione della superficie impartita dal plasma è parte della superficie e non è un rivestimento o di altro livello che può essere rimosso o degradati. Se tenute sotto liquido, questo tipo di modifica può mantenere la sua capacità delle cellule di guida per mesi. La parte più critica della sperimentazione necessaria per garantire risultati significativi è quello di creare il modello maestro che alla fine sarà utilizzato per l&#39;orientamento delle cellule. Se questo modello non è progettato correttamente, le cellule non rispecchia in modo appropriato il modello e non possono produrre comportamenti utili. Parametri quali spessore della linea, la spaziatura modello, e altri possono influenzare notevolmente la compatibilità delle cellule con un motivo particolare, e in genere una serie di parametri quali possono essere creati sul fotomaschera iniziale allo schermo per il disegno più appropriato. Altri importanti parametri relativi alla realizzazione di patterning includono la creazione dello stampo, il mantenimento di un ambiente privo di polvere, la semina delle cellule e sterilità generale di colture cellulari. Creazione dello stampo può essere effettuato mediante le fasi di trasferimento vari che sono impegnati a consentire ripetute PDMS mollare gli ormeggi uno stampo epossidica. Lo stampo epossidica è creato, perché non si degradano nello stesso modo come resistere alla muffa con le piccole, le strutture di alta proporzioni sotto getto ripetuto. Se lo stampaggio di trasferimento è fatto correttamente, le dimensioni e la resa non sarà influenzato, ma se fatto in modo errato, come da poco degasaggio, curando incomplete, o riscaldamento eccessivo, bolle, rugosità e deformazione di un pattern può verificarsi che influenza il risultato finale. In relazione a mantenere un ambiente privo di polvere, gli stampi devono essere tenuti il ​​più pulito possibile, come la polvere può interferire con il corretto contatto tra lo stampo di lavoro PDMS e la superficie, e quindi adeguato al plasma schermatura e patterning chimico. La densità di semina delle cellule inoltre deve essere ottimizzata per garantire che né le cellule troppo pochi o troppi abitano la zona pattern e sterilità deve essere mantenuto per evitare la contaminazione batterica e di altri delle cellule in uso. La tecnica può anche essere integrato con altri elementi come microfluidica, microelettrodi, e sonde meccaniche. Questo fornisce stimoli alle cellule per replicare meglio varie condizioni fisiologiche durante la sperimentazione e le future attività è focalizzata sullo studio degli effetti di queste combinazioni

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> Plasma e della Camera Vacuum Cleaner </td><td> Harrick Plasma </td><td> PDC-001 </td><td></td></tr><tr><td> Fluorescenza invertito e microscopio a contrasto di fase </td><td> Nikon </td><td> TE2000-U </td><td></td></tr><tr><td> Microscopio stadio superiore incubatore </td><td> AmScope </td><td> Modello TCS-100 </td><td> Modificato per includere un contenitore che fornisce un ambiente appropriato </td></tr><tr><td> Piatto polistirolo Petri </td><td> VWR </td><td> 25384-090 </td><td></td></tr><tr><td> Polidimetilsilossano (PDMS) </td><td> Dow Corning </td><td> Sylgard 184 </td><td></td></tr><tr><td> Epossidica </td><td> Devcon </td><td> 2 epossidica tonnellata chiaro # 14310 </td><td></td></tr><tr><td> Cellula cultura dei media </td><td> Vari </td><td></td><td> Mezzi di comunicazione segue formulazioni standard per tipo di cellula </td></tr><tr><td> L&#39;acido retinoico </td><td> Sigma </td><td> R2625 </td><td></td></tr></tbody></table>

plasma surface patterning litografia per la creazione di reti di cella

Plasma Lithography Surface Patterning for Creation of Cell Networks

Manipolazione sistematica di un microambiente cellulare con risoluzione micro e nanometriche è spesso necessaria per decifrare vari fenomeni cellulare e molecolare. Per soddisfare questa esigenza, abbiamo sviluppato una tecnica di litografia plasma per manipolare il microambiente cellulare, creando una superficie modellata con dimensioni caratteristiche che vanno da 100 nm a millimetri. L&#39;obiettivo di questa tecnica è quello di poter studiare, in modo controllato, i comportamenti delle singole cellule e gruppi di cellule e le loro interazioni. Questo metodo litografia plasma si basa sulla modificazione selettiva della chimica di superficie su un substrato tramite il contatto di schermatura a bassa temperatura al plasma con uno stampo fisico. Questa schermatura selettiva lascia un modello chimico che può guidare l&#39;attaccamento delle cellule e del movimento. Questo modello, o un modello di superficie, può essere utilizzato per creare reti di cellule la cui struttura in grado di simulare quella che si trova in natura e produce un ambiente controllabile per le indagini sperimentali. La tecnica è particolarmente adatto a studiare come fenomeno biologico che produce modelli di superficie stabile su substrati polimerici trasparenti in maniera biocompatibile. I modelli di superficie durare per settimane o mesi e può così guidare l&#39;interazione con le cellule per lunghi periodi di tempo che facilita lo studio dei processi cellulari a lungo termine, quali la differenziazione e adattamento. La modifica alla superficie è principalmente di natura chimica, e quindi non introduce interferenze topografica o fisica per l&#39;interpretazione dei risultati. Inoltre non comporta alcun sostanze dure o tossiche per raggiungere patterning ed è compatibile per la coltura di tessuti. Inoltre, può essere applicato a modificare i vari tipi di substrati polimerici, che per la possibilità di regolare le loro proprietà sono ideali e sono ampiamente usati in applicazioni biologiche. La risoluzione ottenibile è anche utile, come l&#39;isolamento dei processi specifici come la migrazione, adesione, o vincolante permette discrete, le osservazioni chiaro al singolo livello multicella. Questo metodo è stato impiegato per formare reti diverse di tipi cellulari diversi per le indagini che coinvolgono la migrazione, di segnalazione, formazione di tessuto, e il comportamento e le interazioni dei neuroni chiamati in giudizio in una rete.

Un versatile tecnica di litografia plasma è stata sviluppata per generare modelli di superficie stabile per guidare l&#39;attaccamento cellulare. Questa tecnica può essere applicata a creare reti di cellule, comprese quelle che imitano i tessuti naturali ed è stato utilizzato per lo studio dei diversi tipi di cellule distinte.

Plasma Surface Patterning litografia per la creazione di reti di cella

La manipolazione sistematica del microambiente cellulare con risoluzione micro e nanometrica è spesso necessaria per decifrare vari processi cellulari e molecolari...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è creare microambienti cellulari per studiare domande biologiche relative ai comportamenti cellulari individuali e di gruppo che avvengono a dimensioni micro- e nanometriche. Questo risultato si ottiene innanzitutto progettando dei modelli che guideranno il posizionamento delle cellule. Successivamente, questi disegni vengono tradotti in superfici stampate mediante fotolitografia, che permette la creazione di stampi di schermatura al plasma attraverso la litografia morbida.Infine, questi stampi schermanti vengono disposti a treppiede in una piastra di Petri per consentire un'esposizione selettiva delle superfici sottostanti al plasma, il che lascerà un modello chimico sensibile alle cellule nelle aree al di sotto di ciascuno stampo. I risultati ottenuti possono mostrare come il comportamento di una cellula dipenda dal suo microambiente e dalle sue interazioni con le cellule vicine. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande fondamentali sugli effetti dei microambienti sul comportamento cellulare, ad esempio: come le interazioni tra gruppi di cellule influenzano i fenomeni di ordine superiore?E come influenzano le funzioni a livello subcellulare segnali a scala nanometrica, come la migrazione cellulare e la differenziazione? Per prima cosa, utilizzare una colla istantanea per fissare una diapositiva con un modello a un blocco di diapositive vuote. Successivamente, creare un contenitore di carta d'alluminio leggermente più grande del blocco di diapositive e sufficientemente ampio da contenere 30 grammi di poli dimetil silossano o PDMS.Posizionare la pila di vetrini nel contenitore e quindi versare il PDMS sulla pila di vetrini per creare un'impronta iniziale. Degasare il PDMS ponendo il contenitore all'interno di una camera a vuoto. Eliminare eventuali bolle presenti nel PDMS rimuovendo e riposizionando rapidamente un dito sul tubo della valvola di aspirazione più volte, in modo da permettere brevemente all'aria di fluire nella camera.La valvola viene chiusa per cinque minuti di degasaggio ininterrotto. Successivamente, lasciare polimerizzare il PDMS nell'incubatore a flusso laminare pulito a temperatura ambiente per uno o due giorni. Una volta polimerizzato, il PDMS viene staccato dal modello maestro, formando uno stampo.Successivamente, versare uno strato sottile di sei grammi di una resina epossidica bicomponente appena mescolata per un minuto nello stampo maestro. Disaerare immediatamente l'epossidico mediante numerosi cicli di rottura delle bolle prima che la resina si solidifichi. Dopo aver lasciato riposare indisturbato l'epossidico disaerato per un'ora, questo sarà parzialmente polimerizzato.Aggiungere ulteriore epossidico nello stampo senza sottoporlo a degasaggio per produrre una struttura più spessa, che sarà più facile da manipolare nei passaggi successivi. Lasciare quindi polimerizzare l'epossidico per uno o due giorni. Una volta che lo stampo in epossidico è polimerizzato, rimuoverlo dallo stampo master in PDMS e quindi avvolgere del nastro attorno allo stampo in epossidico per formare un contenitore.Un modello funzionante può quindi essere creato versando il PDMS sul modello in resina epossidica, sottoponendo il PDMS a degasaggio e lasciando polimerizzare il nuovo modello per uno o due giorni. Una volta completata la polimerizzazione del modello funzionante, staccare delicatamente il modello dall'epossidica e conservare entrambi all'interno di piastre di Petri, riposte in un contenitore di plastica sigillato all'interno della cappa a flusso laminare per mantenere le condizioni di pulizia. Per preparare un modello per la stampa superficiale, tagliare piccole sezioni del modello funzionante con una lametta e posizionare le sezioni all'interno di una piastra di Petri.Le posizioni di queste sezioni di stampo vengono etichettate sul retro della piastra di Petri con un pennarello indelebile, tracciando un contorno intorno alle sezioni dello stampo disposte a treppiede, e si attende che il treppiede garantisca un contatto aderente tra lo stampo attivo e la superficie della piastra di Petri. Controllare il fondo della piastra per confermare un posizionamento corretto, evidenziato dalla presenza di canali visibili a occhio nudo o con una piccola lente di ingrandimento. Posizionare l'insieme all'interno di una camera al plasma.Avviare il trattamento al plasma dopo il trattamento al plasma. Rimuovere il sistema di stampo e pesi e posizionare la piastra di Petri all'interno di un armadio a sicurezza biologica sotto luce UV per 10 minuti per la sterilizzazione. Conservare la piastra in tale ambiente fino al momento della semina con cellule.Diluire le cellule sperimentali scelte nel loro mezzo di coltura standard per raggiungere la confluenza desiderata. Una volta posizionate sulla superficie della piastra di Petri stampata, versare tre millilitri della soluzione cellulare nella piastra di Petri. Incubare la piastra di Petri stampata a 37 gradi Celsius, 5% di anidride carbonica, umidità al 100% per diverse ore fino a diversi giorni, in modo da permettere alle cellule di assemblarsi sul modello creato dalla cellula al plasma.Il patterning viene verificato mediante microscopia a contrasto di fase. Quando si coltivano cellule di neuroblastoma, aggiungere giornalmente 10 micromolar di acido retinoico fino a quando non si osserva la differenziazione cellulare verso uno stato simile a quello neuronale. Sostituire il terreno di coltura standard ogni tre o quattro giorni.Un risultato tipico dell'applicazione della tecnica di litografia al plasma è la formazione di un modello di cellule che ricorda una struttura arbitraria o naturale. Un esempio di ciò è visibile in questa figura, in cui neuroni differenziati con acido retinoico sono stati disposti su un modello di linee. E in questa figura, in cui sono stati creati linee e reti di neuroni. Possono essere utilizzati anche tipi cellulari diversi dai neuroni, come mostrato nelle prossime due figure: questa figura mostra cellule endoteliali da vena ombelicale umana, e questa figura mostra cellule muscolari scheletriche C2C12 che formano griglie, come mostrato qui.Materiali come la polilisina possono essere anche stampati per facilitare l'adesione di determinati tipi cellulari e per altre applicazioni. Seguendo questa procedura, è possibile incorporare ulteriori input come microfluidica, sondaggio cellulare o manipolazione genetica di proteine specifiche, al fine di rispondere ad altre domande, ad esempio come le combinazioni di stimoli influenzano il comportamento cellulare individuale e di ordine superiore?

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Monostrati auto-assemblati (SAM) formato da tioli alcani a catena lunga su oro fornire ben definito substrati per la formazione di pattern proteico delle cellule e di confino. Stampa microcontact di hexadecanethiol utilizzando un (PDMS) polidimetilsilossano timbro seguita da riempimento con un glicole-terminated alcano tiolo monomero produce un modello in cui proteine ​​e cellule di assorbire solo alla regione timbrato hexadecanethiol.

La creazione di substrati Patterned bidimensionali per confinamento di proteine ​​e cellule

In questo protocollo, dimostriamo la fabbricazione di substrati di coltura cellulare cardiaca biomimetica realizzati con due materiali polimerici distinti utilizzando la litografia a forza capillare.  I metodi descritti forniscono una tecnica scalabile ed economica per ingegnerizzare la struttura e la funzione dei tessuti cardiaci macroscopici per applicazioni in vitro e in vivo.

Capillare Forza litografia per Cardiac Tissue Engineering

Questo protocollo descrive un metodo compatibile microfabbricazione per patterning cellulare su SiO 2. Un disegno predefinito parylene-C è fotolitograficamente stampato su SiO 2 wafer. Dopo l'incubazione con siero (o altra soluzione di attivazione) cellule aderiscono specificamente (e crescere secondo la conformità dei) sottostante parylene-C, pur essendo repulsione per SiO 2 regioni.

Patterning cellulare su fotolitograficamente Definito parylene-C: SiO<sub&gt; 2</sub&gt; Substrati

Sono descritti protocolli per singolo neurone microfluidica arraying e mascheramento acqua per il patterning plasma in-chip di rivestimenti biomateriale. Co-colture altamente interconnessi possono essere preparati utilizzando gli ingressi di cellule minimali.

Preparazione della neuronali Co-culture con precisione singola cella

Questo protocollo descrive una metodologia di bioprinting che utilizza un sistema di deposito robotico automatizzato che incorpora segnali di guida topografici incisi con la deposizione di precisione di una cella contenente idrogel bioink. Le celle stampate vengono consegnate direttamente alle caratteristiche incise e sono in grado di percepirle e orientarsi con esse.

Tecnica Automated robotica erogazione di orientamento della superficie e Bioprinting di celle

Viene presentato un protocollo per la produzione di una vasta area di substrato nanostrutturato da piccoli stampi nanomodellati per lo studio della modulazione nanotopografica del comportamento cellulare.

Espansione nanostrutturati Substrati utilizzando la tecnica del punto per Nanotopographical Modulazione di Cell Comportamento

Questo rapporto descrive una tecnica semplice e facile da eseguire, utilizzando il vuoto a bassa pressione, per riempire canali microfluidici con cellule e substrati per la ricerca biologica.

Un metodo versatile di patterning proteine ​​e cellule

Qui presentiamo un protocollo per wide area scansione sonda nanolitografia attivata per l'allineamento iterativo di sonda matrici, come pure l'utilizzo di modelli litografici per studi di interazione della cellula-superficie.

Grande area scansione sonda nanolitografia nei paraggi allineamento automatico e sua applicazione alla fabbricazione di substrato per gli studi della coltura delle cellule

Questo protocollo introduce un metodo di micromodellazione senza litografia che è semplice e accessibile a coloro che hanno un background di bioingegneria limitato. Questo metodo utilizza stencil personalizzati tagliati al laser per micropattern proteine a matrice extracellulare in una forma di interesse per la modulazione delle morfologie cellulari. La procedura per la micropatterning è dimostrata utilizzando cardiomiociti derivati da cellule staminali pluripotenti indotti.

Micropatterning a cella singola semplice senza litografia con stencil laser-cut

Il protocollo qui presentato consente la fabbricazione automatizzata di micropattern che standardizzano la forma cellulare per studiare le strutture citoscheletriche all'interno delle cellule di mammifero. Questa tecnica di facile utilizzo può essere impostata con sistemi di imaging disponibili in commercio e non richiede apparecchiature specializzate inaccessibili ai laboratori standard di biologia cellulare.

Controllo della geometria cellulare attraverso il micropatterning laser assistito a infrarossi

Tradizionalmente, la coltura cellulare viene eseguita su substrati planari che imitano male l'ambiente naturale delle cellule in vivo. Qui descriviamo un metodo per produrre substrati di coltura cellulare con geometrie curve fisiologicamente rilevanti e proteine extracellulari micropatternate, consentendo indagini sistematiche sul rilevamento cellulare di questi segnali extracellulari.

Generazione di microambienti cellulari multicue mediante fotopatterning UV di substrati tridimensionali di colture cellulari

Impara la litografia al plasma per creare microambienti cellulari controllati e studiare il comportamento di singole cellule e gruppi cellulari. Questa tecnica versatile permette di formare reti cellulari che imitano i tessuti naturali.

Plasma Surface Patterning litografia per la creazione di reti di cella

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