Isolamento e coltura dei neuroni dopaminergici del mesencefalo embrionale primario di topo

Prendiamo il tessuto del pavimento del mesencefalo isolato dalla regione ventrale del mesencefalo di embrioni di topo.

Il tessuto è ricco di neuroni dopaminergici in via di sviluppo, che rilasciano il neurotrasmettitore dopamina.

Aggiungere una soluzione enzimatica per abbattere la matrice tissutale, allentando così le cellule.

Aggiungere una soluzione di siero contenente DNasi I e dissociare meccanicamente il tessuto digerito per generare una sospensione cellulare. Le proteine del siero inibiscono gli enzimi, mentre la DNasi I degrada il DNA extracellulare rilasciato durante la lisi cellulare, prevenendo l'aggregazione cellulare.

Lascia che i detriti di tessuto si depositino e trasferisci le cellule sospese in una nuova provetta.

Centrifugare e rimuovere il surnatante, quindi risospendere le cellule in un mezzo neuronale dopaminergico, o DPM.

Prelevare una micropiastra rivestita con un substrato di coltura cellulare al centro dei pozzetti, creando delle micro-isole.

Trasferisci le cellule al centro delle micro-isole per coltivarle ad alta densità.

Incubare, permettendo alle cellule di aderire alle micro-isole.

Riempire i pozzetti con DPM e incubare, facilitando la crescita dei neu