Differenziazione di cellule staminali pluripotenti indotte in cellule progenitrici neurali

Prelevare una micropiastra contenente una coltura aderente di fibroblasti embrionali di topo, o MEF, in un terreno.

I MEF aderenti funzionano come uno strato di alimentazione, fornendo un microambiente di coltura cellulare di supporto.

Rimuovere il terreno e introdurre cellule staminali pluripotenti indotte umane, o hiPSC, in un terreno hiPSC integrato con piccole molecole che migliorano la sopravvivenza cellulare.

Incubare per consentire alle hiPSC di aderire allo strato di alimentazione, che secerne fattori di crescita che facilitano la proliferazione delle hiPSC.

Rimuovere il terreno e aggiungere una soluzione enzimatica per staccare le cellule. Trasferire le cellule e centrifugarle, quindi rimuovere il surnatante e risospenderle nel terreno hiPSC.

Trasferire le cellule su una piastra rivestita di biopolimero. Incubare per consentire ai MEF di aderire.

Trasferire le hiPSC sospese in una micropiastra con fondo a V. Centrifugare le cellule e incubarle, inducendo la formazione di aggregati cellulari.

Reintegrare con un mezzo di differenziazione. I nutrienti del terreno e le interazioni cellula-cellula all'interno dell'aggregato facilitano la differenziazione di hiPSC in cellule pro