Contrazione Arteria mesenterica e Studi Relax Utilizzando Myography automatica Wire

Questa procedura utilizza ratti sensibili al sale e resistenti al sale per confrontare la reattività delle arterie di resistenza mesenterica sotto tensione di fenilefrina con il calcio extracellulare. Ciò si ottiene isolando prima l'arcata mesenterica dagli animali e sezionando i rami dell'arteria di resistenza. Prossimo. Il primo dei due fili di acciaio inossidabile viene infilato attraverso un breve segmento dell'arteria sezionata e il recipiente viene montato nella camera del grafo.

Quindi il secondo filo di acciaio inossidabile viene infilato attraverso il lume del recipiente parallelamente al primo filo. Successivamente, il recipiente montato viene allungato a una circonferenza interna normalizzata. La fase finale della procedura consiste nel riattivare il vaso sfidandolo con applicazioni ripetute di fenilefrina e rilassandolo con applicazioni cumulative di calcio.

In definitiva, i risultati mostrano variazioni di tensione nel vaso, che possono essere convertite in una curva di risposta al calcio e utilizzate per determinare i valori di EC 50. Per confronto. Abbiamo avuto l'idea di utilizzare questo metodo per la prima volta quando abbiamo scoperto che la rete nev di batterie in muratura per ratti esprimeva un recettore del calcio e del rame gpro.

Questo può essere studiato allo stesso modo dei recettori AIC amari, che vengono attivati dall'agonista. In generale, gli individui che non conoscono questo metodo possono avere difficoltà perché l'endotelio e gli strati muscolari lisci sono piccoli. I vasi si danneggiano facilmente.

In tal caso, le proprietà meccaniche di questi recipienti potrebbero essere compromesse. Per iniziare, preparare l'area di lavoro e gli strumenti chirurgici. Posiziona un animale anestetizzato sulla schiena e pulisci l'addome con alcol.

Dopo aver eseguito una laparotomia della linea mediana, utilizzare le forbici per rimuovere circa 85 centimetri di intestino, compresa l'arteria mesenterica superiore. Tagliare l'estremità prossimale vicino ai pilori e l'estremità distale vicino alla giunzione ileocecale. Porre la sezione asportata in una capsula di Petri rivestita contenente una soluzione salina fisiologica o PSS a temperatura ambiente.

Fissare l'estremità prossimale dell'intestino a destra e poi bloccare il resto dell'intestino in senso antiorario. Quindi, seziona un segmento dell'arteria mesenterica contenente i rami due e tre e un pezzo di intestino dall'estremità prossimale. Identificare il punto di ramificazione a forma di V dell'arteria mesenterica e sezionarlo lontano dalla vena.

Usa una pinza per estrarre delicatamente il tessuto adiposo e connettivo per evitare il contatto diretto con l'arteria. Per iniziare a montare il recipiente, tagliare due segmenti di arteria lunghi circa due millimetri. La punta di un filo di acciaio inossidabile privo di tungsteno da 40 centimetri può essere utilizzata per aprire il lume dell'arteria.

Quindi utilizzare una pinza fine per inserire il filo nel lume di ciascuna arteria. Facendo attenzione a non danneggiare l'endotelio, riempire la camera di innesto myo con PSS a 37 gradi Celsius. Utilizzare una pinza per trasferire il segmento del recipiente filettato nella camera.

Quindi, trasferire il segmento del vaso prossimale asportato nella camera miografica e tirare l'estremità lungo il filo per inserirlo nel recipiente. Evitare di allungare il recipiente. Fissare l'estremità più vicina del filo in senso antiorario sotto la vite di fissaggio vicina sulla ganascia destra collegata al micrometro.

Afferrare l'estremità libera del filo con una pinza e fissarla in senso orario sotto la vite di fissaggio più lontana sulla ganascia destra, assicurarsi che il segmento del vaso lungo il filo sia situato nello spazio tra le ganasce senza entrare in contatto con la ganascia stessa. Avvitare le ganasce. Allineare il secondo filo parallelamente al recipiente e inserirlo nell'estremità più lontana del lume.

Far passare delicatamente il filo attraverso il lume del segmento del vaso in un solo movimento utilizzando il filo già montato come guida. Tenere il filo a circa un centimetro dal vaso per evitare di allungarlo durante la manovra ed evitare di toccare l'endotelio. Avvitare le ganasce insieme e assicurarsi che il secondo filo di montaggio si muova sotto il primo fissato sulla mano destra.

Ganascia Fissare l'estremità più vicina del secondo filo in senso orario sotto la vite di fissaggio vicina della ganascia sinistra collegata al trasduttore. Fissare l'estremità più lontana del filo sotto la vite di fissaggio sulla ganascia sinistra e serrare per allungare il filo. Una volta completato il montaggio, attendere 30 minuti per l'equilibrio a 37 gradi Celsius.

Dopo l'equilibratura, il motore viene ripristinato dal menu di montaggio e viene avviata la procedura di normalizzazione, che allunga il recipiente a una circonferenza interna normalizzata. Per iniziare, apri il menu di normalizzazione e imposta la pressione transmurale target a 13,3 kilopascal. Impostare quindi la durata di ognuno dei passaggi di normalizzazione su 60 secondi.

Il rapporto IC 1/IC 100 dovrebbe essere uguale a 0,9 e la calibrazione IP dovrebbe essere impostata su due stelle delta. Misurare la lunghezza dell'arteria mesenterica montata utilizzando le letture dell'oculare del microscopio quando le linee dei capelli sono oltre i neuroni del segmento vascolare. Dopo la normalizzazione, i vasi vengono riattivati eseguendo un avvio standard costituito da una serie di stimolazioni e periodi di washout.

Innanzitutto, sostituire il coperchio della camera myo e avviare l'aerazione con il 95% di aria e il 5% di anidride carbonica. Riempire la camera con PSS fresco contenente acido ascorbico 100 micromolare. Contrarre il recipiente con cinque micromolari di finocchio, rine o PE per cinque minuti e lavare quattro volte con tampone PSS Dopo l'ultimo lavaggio, riempire nuovamente la camera con PSS e attendere tre minuti prima di riempire nuovamente la camera con PSS e contrarsi con PE.As mostrato in precedenza, l'arteria è ora pronta per l'esperimento.

Misurare il rilassamento dei vasi contratti aggiungendo cumulativamente concentrazioni crescenti di cloruro di calcio. Questa tabella mostra che le tensioni basali dopo l'applicazione della fenilefrina variavano tra ratti wistar DS o bambola sensibili al sale e DR o bambola resistenti al sale. Questa traccia da un ratto Wistar mostra il rilassamento delle arterie contratte dall'EP mediante aggiunte cumulative di rilassamento del calcio con grave compromissione nei tessuti dei ratti DS rispetto ai ratti Wistar e rispetto ai Dr.Rats come si vede qui, le differenze nella sensibilità al calcio possono essere viste nelle curve di risposta al calcio e di nuovo quando si calcolano i valori di EC 50.

Infine, i ratti DS mostrano una riduzione dell'espressione del recettore sensibile al calcio nelle arterie rispetto ai Dr.Ratti una volta padroneggiati. Questa tecnica può essere eseguita in due ore se eseguita correttamente. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come confrontare la reattività vascolare di piccoli attributi enterici con composti esogeni in condizioni isometriche.