Determinazione dell'effetto dell'ormone della crescita sui neuroni della kisspeptina utilizzando un patch clamp a cellula intera

Fissare una fetta ipotalamica di topo transgenico in una camera di registrazione perfusa con aCSF.

La fetta contiene neuroni kisspeptina fluorescenti che esprimono la proteina di fusione, cruciali per la regolazione del sistema riproduttivo.

Assemblare una micropipetta comprendente un elettrodo di registrazione in una soluzione interna.

Localizzare al microscopio un neurone kisspeptina fluorescente.

Applicare una pressione positiva alla pipetta e farla avanzare verso il neurone bersaglio. Al contatto, la pressione crea una rientranza sulla membrana neuronale.

Applicare una breve pressione negativa, formando una tenuta ad alta resistenza tra la micropipetta e la membrana.

Impostare la tensione di mantenimento al potenziale di riposo fisiologico del neurone per misurazioni accurate.

Applicare brevi impulsi di pressione negativa per rompere la membrana, stabilendo una configurazione dell'intera cellula.

Confermare la vitalità del neurone monitorando i parametri.

Introdurre un ormone della crescita di prova, che innesca le vie di segnalazione e induce cambiamenti nel potenziale di membrana del neurone.

Misurare le variazioni del potenziale di membrana per determinare l'effetto inibitor