Modellazione della morte neuronale indotta da specie reattive dell'ossigeno nei neuroni dei granuli cerebellari di topo

Prendiamo una coltura di neuroni di granuli cerebellari primari di topo.

Aggiungere terreni contenenti perossido di idrogeno, una specie reattiva dell'ossigeno o ROS, e incubare brevemente.

Il perossido di idrogeno si diffonde nelle cellule e viene convertito in radicali liberi altamente reattivi.

Questi radicali inducono la perossidazione lipidica, compromettendo l'integrità della membrana cellulare.

Inoltre, i radicali causano modifiche ossidative nelle proteine cellulari, compromettendone la funzione.

Inoltre, inducono rotture del DNA, portando all'instabilità genomica.

I radicali causano anche danni ossidativi agli organelli intracellulari, compresi i mitocondri.

In risposta, i mitocondri danneggiati rilasciano citocromo c, che si lega al fattore di attivazione della proteasi apoptotica-1, innescando la formazione di apoptosomi e la conversione della pro-caspasi-9 in caspasi-9 attiva.

La caspasi 9 attiva le caspasi esecutrici, scindendo ulteriormente le proteine cellulari e portando alla morte neuronale apoptotica.

Sostituire il fluido con un fluido nuovo e privo di perossido di idrogeno per arrestare la cascata di segnalazione.

Per la morte cellulare indotta dai ROS, trattare i neuroni con perossido di idrogeno a 75-100 micromolari per cinque minuti. Dopo cinque minuti, passare ai supporti condizionati da impostazioni cultura parallele.

A causa dell'instabilità del perossido di idrogeno, la concentrazione deve essere ottimizzata a un livello che induca tra il 50% e il 70% di morte cellulare dopo 24 ore. Questa concentrazione è solitamente compresa tra 75 e 100 micromolari.