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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 1:59 min. • July 8th, 2025
Prendiamo una coltura di neuroni di granuli cerebellari primari di topo.
Aggiungere terreni contenenti perossido di idrogeno, una specie reattiva dell'ossigeno o ROS, e incubare brevemente.
Il perossido di idrogeno si diffonde nelle cellule e viene convertito in radicali liberi altamente reattivi.
Questi radicali inducono la perossidazione lipidica, compromettendo l'integrità della membrana cellulare.
Inoltre, i radicali causano modifiche ossidative nelle proteine cellulari, compromettendone la funzione.
Inoltre, inducono rotture del DNA, portando all'instabilità genomica.
I radicali causano anche danni ossidativi agli organelli intracellulari, compresi i mitocondri.
In risposta, i mitocondri danneggiati rilasciano citocromo c, che si lega al fattore di attivazione della proteasi apoptotica-1, innescando la formazione di apoptosomi e la conversione della pro-caspasi-9 in caspasi-9 attiva.
La caspasi 9 attiva le caspasi esecutrici, scindendo ulteriormente le proteine cellulari e portando alla morte neuronale apoptotica.
Sostituire il fluido con un fluido nuovo e privo di perossido di idrogeno per arrestare la cascata di segnalazione.
Per la morte cellulare indotta dai ROS, trattare i neuroni con perossido di idrogeno a 75-100 micromolari per cinque minuti. Dopo cinque minuti, passare ai supporti condizionati da impostazioni cultura parallele.
A causa dell'instabilità del perossido di idrogeno, la concentrazione deve essere ottimizzata a un livello che induca tra il 50% e il 70% di morte cellulare dopo 24 ore. Questa concentrazione è solitamente compresa tra 75 e 100 micromolari.