Determinazione dell'interruzione della barriera emato-encefalica utilizzando coloranti fluorescenti in un modello murino EAE
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:26 min. • July 8th, 2025
Iniziare con una soluzione contenente colorante fluorescente verde legato a una grande catena di destrano. Quindi, aggiungere una soluzione di colorante rosso legata a una piccola catena di destrano.
Mescolare accuratamente i coloranti e metterli in una siringa.
Iniettare questa miscela di colorante per via endovenosa in un topo anestetizzato attraverso il seno retro-orbitale, una vena dietro l'occhio.
Questo topo soffre di encefalomielite autoimmune sperimentale o EAE.
In questa condizione, la barriera emato-encefalica è disturbata da giunzioni strette indebolite tra le cellule endoteliali dei vasi sanguigni del cervello con spazi vuoti.
Consentire al topo di svegliarsi completamente e riacquistare la motilità, consentendo ai coloranti di circolare.
Il colorante rosso con la piccola catena di destrano si diffonde facilmente attraverso le piccole fessure nel tessuto cerebrale, mentre il colorante verde legato alla grande catena di destrano si diffonde se il danno è grave.
La quantità di ciascun colorante fluorescente nel tessuto cerebrale è correlata all'entità della rottura della barriera emato-encefalica.
Per preparare le soluzioni madre di destrano, sciogliere 10 milligrammi di
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