Immunocolorazione dei tessuti craniofacciali di topo

Eseguire criosezioni di tessuti craniofacciali embrionali di topo fissati comprendenti cellule della cresta neurale.

Lavare le sezioni in un tampone contenente un detergente non ionico per rimuovere il mezzo di inclusione e permeabilizzare le membrane, consentendo l'accesso ai bersagli intracellulari.

Aggiungere una soluzione bloccante per saturare i siti di legame non specifici.

Rimuovere la soluzione bloccante in eccesso. Quindi, incubare con anticorpi primari mirati agli antigeni nucleari, come fattori di trascrizione e marcatori di proliferazione.

Lavare con tampone per rimuovere gli anticorpi non legati.

Incubare con anticorpi secondari coniugati con fluorofori per legarsi agli anticorpi primari legati all'antigene.

Rimuovere gli anticorpi non legati utilizzando il tampone.

Aggiungere un mezzo anti-sbiadimento con un colorante nucleare fluorescente e coprire con un vetrino coprioggetti.

Il colorante colora i nuclei e il mezzo anti-sbiadimento protegge i segnali fluorescenti durante l'imaging.

Visualizzare le sezioni al microscopio a fluorescenza per valutare l'espressione e la localizzazione dei marcatori nucleari, indicando la proliferazione delle cellule della cresta neurale